【目的要求】 

        1、学会以果蝇为材料进行两对基因遗传杂交实验的基本方法

2、进一步认识两对基因自由组合的原理

3、巩固和提高利用统计学方法处理实验数据的能力

【实验原理】 

双因子遗传是指两对非等位基因位于两对非同源染色体上的遗传规律。由于两对基因的分离是独立的，配子之间的结合又是自由组合的。所以F₂代中会出现9种基因型；4种表现型，比值为9：3：3：1。

【实验材料】 黑腹果蝇 （Drosophila melanogaster）的二个突变品系

纯合亲本为：长翅黑檀体和残翅灰身 

（1）黑檀体突变型ebony（e） 基因位于第三染色体上

（2）残翅突变型  vestigial（vg）基因位于第二染色体

【操作方法】

1、  果蝇饲养和选择亲本

实验前首先将上述两种果蝇分别饲养，待培养瓶里出现幼虫和蛹以后将老果蝇处理掉，然后，在刚从蛹里羽化出来的果蝇中选择杂交亲本，雌果蝇必须是处女蝇。挑选的数量依据实验的要求而定。

2、果蝇的纯合亲本杂交

挑选灰身长翅（或黑身残翅）处女蝇和黑身残翅（或灰身长翅）雄果蝇各5只，放入培养瓶中，进行正反交实验，即

（1）正交：灰身长翅(♀)  × 黑身残翅(♂)

（2）反交：黑身残翅(♀)  × 灰身长翅(♂)

亲本果蝇选定并全部放入杂交瓶中以后，在杂交瓶上贴上标签，标明杂交亲本，杂交日期、实验人姓名。同样将杂交果蝇要放在23℃恒温箱里饲养，如果室温能达到果蝇适宜环境温度，也可在室温条件下饲养。

3、去掉亲本

果蝇培养7—8天，观察培养瓶中是否有幼虫和蛹的出现，如果已经出现就可以去掉亲本，一定要注意去除干净。

4、观察F₁的性状

F₁ 果蝇羽化后，要仔细检查性状是否正确，如果选择亲本准确无误，不管正反交F₁ 都应该是灰身长翅（均为显性 性状），

5、培养杂种F₂代

在白瓷板上鉴别已麻醉的果蝇的性别，从F₁中直接选择5对F₁代雌雄果蝇转入一个新的培养瓶中（为什么不必选择处女蝇？），进行F₁代自交实验。另选择5只F₁代雌果蝇和隐性亲代（黑身残翅）雄果蝇移到新培养瓶中进行回交。放在23℃恒温箱里或温暖处培养。大约一星期后，两培养瓶中有足够的幼虫和蛹时再分别去掉亲本，待自交瓶内杂种F₂代果蝇羽化成虫后，计算四种果蝇的比例。再计算回交瓶内后代的四种果蝇的比例。

6、实验结果统计    将统计的结果按要求填入下列表格中。

F₁（正、反交合瓶统计）果蝇数量

F₂ 代 统计结果

F1和隐性亲本回交结果表

7、卡平方检测，若P > 0.05时，说明符合两对基因自由组合的假说，若P < 0.05时，说明这个实验数据不能用两对基因自由组合来解释。但这是一个验证性实验，两对基因位于不同对的染色体上是毫无疑问的。如果P < 0.05时，只能从其它方面查找原因了，如亲本的处女蝇是否准确；去亲本时去干净了没有；父本的选择有没有错误；亲本原种纯不纯等。