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红细胞比容的测定
作者:未知 来源:华中农业大学 时间:2006-10-23
    [实验目的]  
      学习和掌握测定红细胞比容的方法。
    [实验原理] 
      将定量的抗凝血灌注于特制的毛细玻璃管中,定时、定速离心后,有形成分和血浆分离,上层呈淡黄色的液体是血浆,中间很薄一层为灰白色,即白细胞和血小板(或栓细胞),下层为暗红色的红细胞,彼此压紧而不改变细胞的正常形态。根据红细胞柱及全血高度,可计算出红细胞在全血中的容积比值,即为红细胞比容(压积)(图6.1-1)。
    [实验对象] 
      动物种类不限
    [实验药品] 
      草酸盐抗凝剂(0.8 g草酸钾·H2O + 1.2 g草酸銨·H2O + 甲醛1 ml + 蒸馏水至100 ml)或10 g·L-1肝素,橡皮泥或半融化状态石蜡,75%酒精。
    [仪器与器械]  
      毛细玻璃管(内径1.8 mm,长75 mm)或温氏分血管,酒精灯,水平式高速毛细管离心机(或普通离心机),天平,注射器,长针头,干棉球,刻度尺(精确到mm)。
    [实验方法与步骤] 
      1.微量毛细管比容法
      (1)以抗凝剂湿润毛细管内壁后吹出,让壁内自然风干或于60 ℃~80℃干燥箱内干燥后待用。
      (2)取血:常规消毒,穿刺指(或尾)尖,让血自动流出,用棉球擦去第一滴血,待第二滴血流出后,将毛细管的一端水平接触血滴,利用虹吸现象使血液进入毛细管的2/3(约50 mm)处。
      (3)离心:用酒精灯溶封或橡皮泥、石蜡封堵其未吸血端,然后封端向外放入专用的水平式毛细管离心机,以12000 r·min-1的速度离心5 min。届时用刻度尺分别量出红细胞柱和全血柱高度(单位 mm)。计算其比值,即得出红细胞比容。
      2.温氏分血管比容法
      (1)取大试管和温氏分血管各一支,用抗凝剂处理后烘干备用。
      (2)取血:可采取静脉取血或心脏取血,将血液沿大试管壁缓慢放入管内,用涂有凡仕林的大拇指堵住试管口,缓慢颠倒试管2~3次,让血液与抗凝剂充分混匀,并不能使血细胞破碎,制成抗凝血。
    用带有长注针头的注射器,取抗凝血2 ml将其插入分血管的底部,缓慢放入,边放边抽出注射针头,使血液精确到10 cm刻度处。
      (3)离心:将分血管以3000 r·min-1离心30 min,取出分血管,读取红细胞柱的高度,再以同样的转速离心5 min,再读取红细胞柱的高度,如果记录相同,该读数的1/10即为红细胞比容。
    [注意事项] 
      1.选择抗凝剂必须考虑到不能使红细胞变形、溶解。草酸钾使红细胞皱缩,而草酸銨使红细胞膨胀,二者配合使用可互相缓解。鱼类多用肝素抗凝。
      2.血液与抗凝剂混合、注血时应避免动作剧烈引起红细胞破裂。
      3.用抗凝剂湿润的毛细玻璃管(或温氏分血管)内壁后要充分干燥。血液进入毛细管内的刻度读数要精确,血柱中不得有气泡。
    [实验结果]
      报告该实验动物的红细胞比容。并将全班的结果加以统计,用平均值±标准差表示
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