四、722型分光光度计的使用
1. 选择波长
2．比色杯：（1）液体3/4—2/3，不可过多或过少。（2）用擦镜纸擦干外表面液体。
3. 灵敏度：调整后不再动。
4. 将装有空白溶液的比色杯放入光路。原则：开盖调“D = 0”，关盖调“T = 100”。
五、752型紫外可见分光光度计的使用
1. 选择波长
2．比色杯：测蛋白、核酸时使用石英比色杯，专机专用，余同上。
3. 灵敏度：调整后不再动。
4. 注意：测蛋白、核酸时，开氘灯。
六、蛋白质的测定
常用方法：
1. 根据蛋白质含氮量进行测定的定氮法。
2. 根据蛋白质结构或组成的紫外吸收特性进行测定的紫外分光光度法。
3. 根据蛋白质与不同呈色试剂反应而进行测定的比色法。
【实验内容】
一、酚试剂法（Folin Method）
原理：蛋白质中肽键在碱性溶液中与铜离子形成络合物，此络合物能使酚试剂中的磷钼酸还原产生兰色化合物；同时，蛋白质中的酪氨酸、色氨酸也能与酚试剂的磷钼酸，磷钨酸作用产生兰色化合物，颜色深浅与蛋白质的含量成正比。
试剂：
1. 碱性铜液
2. 酚试剂
3. 0.9% NaCl
4. 标准牛血清白蛋白溶液（1％）
操作步骤：
1．取上述牛血清白蛋白溶液1.0ml用0.9% NaCl稀释10倍后，按下表操作：
温放置20分钟，每管加酚试剂0.5毫升，立即混匀
3．室温放置30分钟后，以第6管为空白管，选波长650nm比色，读取光密度。
二、双缩脲法（Biuret Method）
原理：凡具有两个以上肽键（—CO-NH—）的物质，在碱性溶液中与铜离子反应，形成紫红色络合物，称双缩脲反应。由于蛋白质含有肽键，也能发生双缩脲反应，颜色深浅与蛋白质浓度成正比。
试剂：
1. 双缩脲试剂
2. 0.9% NaCl
3．标准血清
4．待测血清
步骤：
1．取3支干净的试管按下表操作：
2．混匀，30分钟后以第3管为空白管，用520nm波长比色，读取光密度。
3．计算：
蛋白质含量g% = （Du/Ds）×标准蛋白浓度
【注意事项】
1． 试管洗刷干净，刻度吸管专管专用
2． 双缩脲法和酚试剂法两个实验的波长分别为520nm和650nm，测定时注意转换波长
3． 比色测定时，勿触及比色杯光面
