4. 待测溶液浓度的计算：
（1）标准管法：
在同样条件下，测得标准液和待测液的光密度（D）值，然后计算：
标准液：Ds = KsCsLs
待测液：Du = KuCuLu
其中，Ls = Lu，Ks = Lu， Ds/Du = Cs/Cu
Cu =（Du/Ds）×Cs
（2）标准曲线法：
分析大批待测样品时，采用此法较方便。先配制一系列浓度由小到大的标准溶液，测出它们的光密度（D）值。在一定浓度范围内，溶液浓度（C）与其光密度（D）之间呈直线关系。以各管D为纵坐标，C为横坐标，绘制标准曲线。待测溶液D值测出后，在曲线上查出C。
（3）标准系数法：
多次测定标准溶液的光密度后求出平均值，标准系数 = 标准液浓度/标准液平均光密度，同法测出待测液的光密度代入下式：
C = 待测溶液光密度×标准系数
（4）消光系数法：
1%浓度，1cm厚度溶液中测得：K = E1cm1%
或１克分子浓度，１cm厚度溶液中测得：K = ξ
C = D/E1cm%, 或 C = D/ξ
常用于紫外吸收法测定蛋白质，核酸含量，二者分别在280nm和260nm处有最大吸收，其消光系数可查到，在同样条件下，测定待测溶液的光密度, 带入上式即可求得C。
优点：可直接测定，不需呈色，不损失样品, 操作简便
注意：选择1cm石英比色杯（玻璃杯在紫外光区强烈吸收紫外光，不能使用）
二、比色分析的测定方法
1. 比色分析法：
原理：白光透过滤光板后，可得到近似的单色光，让单色光透过有色溶液，然后射到光电池上，光电池受光放出电子，所产生的电流与光的强度成正比关系。
利用滤光板可获得近似的单色光，波长范围30-50nm。滤光板最易透过的光是有色溶液最易吸收的光。一般说来，选择滤光板的颜色应与被测溶液的颜色为互补色。
2. 分光光度法：
分光光度法使用分光光度计，利用棱镜或光栅获得单色光，波长范围3-5nm，所以比比色分析法的灵敏度，准确度和选择性都要高。
三、比色分析条件的选择
1. 波长的选择：原则“吸收最大，干扰最小”
例：A，B两种物质，A物质最大吸收峰在a处，B物质在a处也有吸收，对A物质的测定有干扰，故选b处波长进行比色测定以满足以上原则。
2. 光密度的选择：
D值读数在检流计标尺中部时，准确度较高，相对误差最小。一般D = 0.05—1
3. 显色条件的选择：
比色分析中，常需要利用空白溶液调节仪器的透光率为100%，此时D为0。空白溶液仅仅不含被测物质，而其它溶液，试剂和处理条件与被测溶液完全相同。因此，利用空白溶液可消除显色溶液中其它有色物质的干扰，抵消比色杯和试剂对入射光的影响。
