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免疫组织化学技术常用试剂的配制
作者:未知 来源:生物秀 时间:2006-10-18

    二、显色液
    1. DAB (Diaminobenzidine) 显色液
      DAB(3.3—二氨基联苯胺四盐酸盐)  50mg 
      0.05MTB(或0.01MPBS)              100ml
      30%H2O2                          30~40μl
       配制方法:先以少量0.05MTB(或0.01MPBS)溶解DAB,充分溶解后加入剩余的TB或PBS,摇匀后(避光)过滤,显色前加入30% H2O2,宁少勿多,便于掌握反应过程。阳性为棕黄色颗粒。
      DAB有致癌作用,操作时应格外小心,避免直接与皮肤接触,用后的器皿应充分冲洗,用后的DAB液不应冲入下水道,应集中深埋或清洁液处理后弃之。
    2. AEC(3-amino-9-ethylcarbozloe)显色液
      AEC(3-氨基- 9-乙基卡巴唑)      20 mg
      二甲酰胺(DMF)                2.5 ml
      0.05M醋酸缓冲液(PH5.5)        50 ml
      30% H2O                       25μl
       配制方法:先将AEC溶于DMF中,再加入醋酸缓冲液充分混匀。临显色前加入30% H2O2液。镜下控制显色时间。阳性为深红色颗粒。
    3. 4-氯-1萘酚(4-CL-1-NapHthol)显色液
      4-氯-1萘酚                       100 mg
      无水乙醇                         10 ml
      0.05MTB(PH7.6)                190ml
      30% H2O                                  10μl
       配制方法:先将4-氯-1萘酚溶于无水乙醇中,然后再加入TB190ml,用前加入30%H2O2,显色时间5~20分钟。阳性结果为蓝或深蓝色。
    4. α-萘酚显色液(1)
     α-萘酚AS-BI磷酸盐                  1mg
     坚固红TR盐                         2mg
     底物缓冲液                           2ml
     二甲基甲酰胺(DMF)                 40μl
    配制方法:先将α-萘酚AS-BI磷酸盐溶于40μl DMF中,再加入底物缓冲液2l,临用前10分钟加坚固红TR盐。
     底物缓冲液(PH8.2~8.3)
      0.2M Tris                            50ml
      0.1M HCL                           40ml
      Mg2CL·6 H2O                        20.3mg
      左旋咪唑                            20.4mg
      双蒸水 加至                         100ml
    结果为玫瑰红色,若在底物显色液中用坚固兰BB盐代替坚固红TR盐,终产物为深蓝色。
    5. α-萘酚显色液(2)
     α-萘酚AS-BI磷酸盐                    5mg
     DMF                                   0.05ml
     丙二醇缓冲液(0.05M,PH9.8)           5ml
     坚牢蓝 BB                              2mg
    配制方法:先将α-萘酚溶于DMF中,然后加入丙二醇缓冲液,临用前加入坚牢蓝BB,溶解过滤后使用。
    丙二醇缓冲液(储备液)
     2mol/L:
     2-氨基-2-甲基-1.3丙二醇                   35.64g
     6mol/L HCL                              32ml
     0.005M MgCL2                            4ml
     左旋咪唑                                 480mg
     双蒸水  加至                             200ml
     用HCL或NaOH调PH至9.8。
    取上述储备液1ml用双蒸水稀释至40ml备用。
    阳性结果为蓝色颗粒。

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