二、显色液
1. DAB (Diaminobenzidine) 显色液
DAB(3.3—二氨基联苯胺四盐酸盐) 50mg
0.05MTB(或0.01MPBS) 100ml
30%H2O2 30~40μl
配制方法:先以少量0.05MTB(或0.01MPBS)溶解DAB,充分溶解后加入剩余的TB或PBS,摇匀后(避光)过滤,显色前加入30% H2O2,宁少勿多,便于掌握反应过程。阳性为棕黄色颗粒。
DAB有致癌作用,操作时应格外小心,避免直接与皮肤接触,用后的器皿应充分冲洗,用后的DAB液不应冲入下水道,应集中深埋或清洁液处理后弃之。
2. AEC(3-amino-9-ethylcarbozloe)显色液
AEC(3-氨基- 9-乙基卡巴唑) 20 mg
二甲酰胺(DMF) 2.5 ml
0.05M醋酸缓冲液(PH5.5) 50 ml
30% H2O2 25μl
配制方法:先将AEC溶于DMF中,再加入醋酸缓冲液充分混匀。临显色前加入30% H2O2液。镜下控制显色时间。阳性为深红色颗粒。
3. 4-氯-1萘酚(4-CL-1-NapHthol)显色液
4-氯-1萘酚 100 mg
无水乙醇 10 ml
0.05MTB(PH7.6) 190ml
30% H2O2 10μl
配制方法:先将4-氯-1萘酚溶于无水乙醇中,然后再加入TB190ml,用前加入30%H2O2,显色时间5~20分钟。阳性结果为蓝或深蓝色。
4. α-萘酚显色液(1)
α-萘酚AS-BI磷酸盐 1mg
坚固红TR盐 2mg
底物缓冲液 2ml
二甲基甲酰胺(DMF) 40μl
配制方法:先将α-萘酚AS-BI磷酸盐溶于40μl DMF中,再加入底物缓冲液2l,临用前10分钟加坚固红TR盐。
底物缓冲液(PH8.2~8.3)
0.2M Tris 50ml
0.1M HCL 40ml
Mg2CL·6 H2O 20.3mg
左旋咪唑 20.4mg
双蒸水 加至 100ml
结果为玫瑰红色,若在底物显色液中用坚固兰BB盐代替坚固红TR盐,终产物为深蓝色。
5. α-萘酚显色液(2)
α-萘酚AS-BI磷酸盐 5mg
DMF 0.05ml
丙二醇缓冲液(0.05M,PH9.8) 5ml
坚牢蓝 BB 2mg
配制方法:先将α-萘酚溶于DMF中,然后加入丙二醇缓冲液,临用前加入坚牢蓝BB,溶解过滤后使用。
丙二醇缓冲液(储备液)
2mol/L:
2-氨基-2-甲基-1.3丙二醇 35.64g
6mol/L HCL 32ml
0.005M MgCL2 4ml
左旋咪唑 480mg
双蒸水 加至 200ml
用HCL或NaOH调PH至9.8。
取上述储备液1ml用双蒸水稀释至40ml备用。
阳性结果为蓝色颗粒。


