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病原微生物染色法
作者:未知 来源:生物秀 时间:2006-10-18

     
    二、齐一尼氏抗酸杆菌染色法(Zienl-Neelson)
    齐一尼氏抗酸杆菌染色法是一种传统的经典抗酸染色法,常用来显示结核杆菌、麻疯杆菌。由于染液的加温,可使石碳酸复红进入分枝杆菌内。再用稀酸脱去背景上的多余红色,如用苏木素来染核,杆菌鲜红色对此清晰。
    操作方法:
    (1)切片常规脱蜡。
    (2)石碳酸复红染液滴于切片上,置酒精灯上,徐徐加温,使出现蒸气约5分钟(或在60℃下染30分钟)冷却2分钟。
    (3)水洗。
    (4)1%盐酸酒精分化,切片呈淡桃红色为止(在显微镜下控制)。
    (5)流水洗。
    (6)苏木素或0.5%次甲蓝水溶液染核。
    (7)常规脱水、透明、封固。
    结果:抗酸菌红色,核蓝色。
    试剂配制:
    Ziehl-Neelsony氏石碳酸复染液。
    碱性品红酒精饱和液(约5.95%)    10ml
    5%石碳酸水溶液                  90ml
     
    三、抗酸杆菌的荧光法
    在组织切片中大量的抗酸杆菌易于见到,少量时则难于寻找,用荧光法则比齐一尼氏染色易于找到。
    操作方法:
    ⑴切片置入二甲苯,(1份花生油+2份二甲苯更好)脱蜡至水。
    ⑵在金胺,若丹明溶液中10分钟(60℃)。
    ⑶自来水洗。
    ⑷盐酸酒精分化2分钟。
    ⑸自来水洗。
    ⑹0.5%高锰酸钾液中2分钟。
    ⑺自来水速洗。
    ⑻吸水纸吸干。
    ⑼急速入80%酒精洗。
    ⑽吸水纸吸干。
    ⑾纯酒精。
    ⑿二甲苯透明,用荧光封固剂或DPX及中性树胶封固。
    结果:抗酸杆菌一明亮的黄色荧光,背景不染色。
    试剂配制:
    金胺O(Auramino O)          1.5g
    若丹明B(Rh oolamlire B)    0.75g
    甘油                        75ml
    酚结晶(50℃液化)            10ml
    蒸馏水                      50ml
     
    四、梅毒螺旋体染色法
    Levediti氏组织块整体染色法
    (1)切取2-4mm厚的组织块在10%福尔马林中固定24小时。
    (2)流水冲洗。
    (3)95%酒精24小时。
    (4)蒸馏水洗至组织下沉为止。
    (5)2%硝酸银溶液(暗处)每日换一次,3-4天。
    (6)置于焦性没食子酸—福尔马林还原剂1-2天(焦性没食子酸4克,福尔马林5ml加水至100ml)。
    (7)洗于蒸馏水。
    (8)石蜡切片5微米,脱蜡、封固。
    结果:螺旋体黑色,背景竭色。

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