在组织切片上,显示细菌最常用的染色法是Gram氏染色法,依据染色性状不同,把细菌分为两大类,Gram氏阳性细菌和Gram氏阴性细菌。
分枝杆菌有脂性被膜,用Gram氏染色法染色一般不易着色。为了显示这类杆菌,齐一尼氏石碳酸复红是最常用的经典染色方法。杆菌着色后,具有抗盐酸酒精的脱色作用,故又称抗酸性杆菌,这类细菌在病理学检验中最多见的是结核杆菌和麻疯杆菌。
结核杆菌呈单个或平行聚合排列。
麻疯杆菌与结核杆菌相似,但较短粗。
螺旋体染色目前仍使用经典的Levaditi氏组织块银染法染色。石蜡切片染色则采用Wartrin Starry氏法。
大部分霉菌虽可在HE染色切片中显示出来,但有些则需特殊染色法。如用P.A.S显示白色念球菌,新型隐球菌用Crocott-Gomori氏六胺银法。
一、Gram氏染色法
操作方法:
(1)切片常规脱蜡至水。
(2)结晶紫液中染45秒。
(3)自来水洗。
(4)Gram氏碘1分钟。
(5)在碘丙酮中分化(直到切片无色为止)。
(6)水冲洗。
(7)1%中性红染核1分钟。
(8)自来水速洗。
常规脱水、透明、封固。
结果:Gram氏阳性菌呈蓝黑色,Gram氏阴性菌呈红色。
Gram氏试剂配制。
1.结晶紫染液(Lillie氏)
95%酒精 20ml
结晶紫 2g
草酸铵 1g
蒸馏水 80ml
2.Gram氏碘液
碘结晶 1g
碘化钾 2g
蒸馏水 300ml
3.碘丙酮溶液
Lugot氏碘 2ml
丙酮 98ml
Gram氏切片染色(改良法)
操作方法:
(1)石蜡切片脱蜡常规至水。
(2)HE水溶液染色,伊红较正常深。
(3)1%结晶紫滴于切片染5-10分钟。
(4)倾去染液加Lugol氏碘液5-10分钟。
(5)倾去碘液,滤纸稍印干。
(6)苯胺二甲苯(1:1)分化至无色。
(7)二甲苯洗2次。
(8)二甲苯透明、树胶封固。
结果:Gram阳性细菌及纤维素亮蓝色,核兰色,背景淡红色。
试剂配制:
1.1%龙胆紫或甲紫、结晶紫水溶液。
2.Lugol氏碘液。


