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糖原及粘液染色法
作者:未知 来源:生物秀 时间:2006-10-18
    糖原又名肝糖,它贮藏于肝细胞及肌细胞浆中,其形状为大小不等的颗粒,遇碘则变褐色,易溶于水,机体坏死后,糖原即受到破坏,因此须采取新鲜标本,并及时固定。糖原不等于糖类,只是糖类的一种。
    糖类从组织化学技术的角度分类与生物化学的分类并非一致。从组织化学的角度,糖类可略分为多糖、中性糖液物质和酸性粘液物质及粘蛋白和粘脂质。
    多糖主指糖原,是由许多葡萄糖分子以糖苷键组成的聚合体。当机体死亡,即很快分解为葡萄糖。
    一、过碘酸—Schiff氏法(简称P.A.S)
    操作方法:
    (1)石蜡切片脱蜡至水。
    (2) 0.5%过碘酸水溶液5分钟。或1%过碘酸95%酒精溶液(过碘酸再结晶应重新配制使用)。
    (3)蒸馏水洗,70%酒精洗。
    (4)Schiff氏液15-30分钟。(Schiff氏液从冰箱取出升至室温使用)
    (5)流水冲洗10分钟。
    (6)苏木素浸染细胞核2-3分钟。
    (7)脱水、透明、封盖。
    结果:糖原呈红色,细胞核呈蓝色。
    试剂配制:
    (1)0. 5%过碘酸(HIO4)水溶液或70%酒精溶液。
    (2)Schiff氏试剂。
    碱性品红                                           1g
    蒸馏水                                             200ml
    1N盐酸(98.3ml比重1.16盐酸,加入蒸馏水成1000ml) 20ml
    偏重亚硫酸钠或钾                                    1g
    碱性品红1g加入200ml蒸馏水,搅拌加热沸腾,待冷却至50℃过滤,加入当量盐酸至25℃时加入偏重亚硫酸钠。置于暗处,两天后溶液变桔黄色或草黄色,然后加入少量活性碳并震荡、过滤,此时溶液应为无色。保存冰箱备用。溶液如显浅红色或草黄色,染色效果较差。
    注意事项:
    1、  糖原的固定要及时,而且标本要新鲜。
    2、如用无水酒精作糖原的固定剂,有它的弊病,因无水酒精渗透较慢,而且容易产生极化,(极化是糖原颗粒趋向于细胞的一端)。故用Gendre氏固定液效果较佳,其配法如下:
    苦味酸饱和于95%酒精           85ml
    40%甲醛                        10ml
    冰醋酸                          5ml
    3、各种试剂必须化学纯,亚硫酸钠须有浓厚气味,器皿必须洁净而干燥,染色缸亦是。
    4、如果Schiff氏试剂,在经过活性碳吸附漂白后不显无色,首先应考虑试剂中的偏重亚硫酸钠是否失效。如果偏重亚硫酸钠气味不浓,使用时可考虑适当的增加用量。其次考虑碱性品红本身,常常虽属同一生产厂家,但不同批号,其效果就可能不同,应特别引起注意。
    二、粘液染色法:
    粘液一般有以下几点特性:
    (1) 对盐基性染料有亲合力,因此在HE染色中、切片上的粘液呈污秽蓝色。
    (2) 对某种盐基性人工合成染料如硫堇或甲苯胺蓝有异染性。
    (3) 遇醋酸发生沉淀,胃粘蛋白则除外。
    (4) 溶于弱碱溶液。
    常用的粘液染色有以下几种:
    1、P.A.S染色法:
    操作方法同前,结果;中性粘液性物质,某些酸性粘液物质呈红色,核呈蓝色。
    2、AB/P.A.S染色法:
    该种方法的特点是能同时显示出酸性和中性粘液物质。
    操作方法:
    (1)切片常规脱蜡入水。
    (2)3%醋酸液洗2分钟,入1%阿利新兰醋酸液(PH2.5)10-20分钟。
    (3)蒸馏水洗。
    (4)按P.A.S染色程序。
    (5)苏木素淡染2-3分钟,水洗。
    (6)常规脱水、封片。
         结果:酸性粘液呈蓝色,中性粘液呈红色,混合性粘液呈紫色,细胞核呈淡蓝色。
         3、高铁二胺(HID)/AB染色法:
    该种方法的特点是能同时显示酸性粘液和硫酸粘液物质。
    操作方法:
    (1)切片常规脱蜡入水。
    (2)入高铁二胺溶液反应18-24小时(或37℃过夜)。
    (3)蒸馏水洗。
    (4)接AB(PH2.5)染色程序。
    (5)常规脱水封片。
    结果:酸性粘液物质呈蓝色,硫酸粘液呈棕黑色。
    试剂配制:
    (1)1%阿利新兰醋酸液(PH2.5)
    阿利新兰                     1g
    冰醋酸                       3ml
    蒸馏水                       97ml
    (2)高铁二胺(HID)液
     二甲基间苯二胺二盐酸盐        1.2g
     二甲基对苯二胺二盐酸盐        0.2g
     40%氯化铁                  1.4ml
      蒸馏水                     50ml
      临用时新配。溶液PH值1.5-1.6
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