固定剂的选择取决于研究工作当时和下一步的需要,在选择混合固定剂时,应注意各种试剂的平衡,如使组织收缩的试剂可配以使组织膨胀的试剂,渗透力弱的可与渗透力强的混合使用。但是,氧化剂原则上不与还原剂混用,如需要时,只能在使用前临时混合。一种混合固定剂内不宜有两种以上的盐类,以免产生复盐影响对组织的固定,如氧化纳和氯化钠同时应用时,常将氯化钠改用硫酸钠。技术工作者和病理工作者都应了解各种固定剂的性能。固定液的选择恰当,才能获得满意的制片结果。
混合固定液的种类很多,本章内所述的固定剂皆是较常用的,特殊染色所需的固定剂皆列在相应的标题下。
Miiller氏液
配方:重铬酸钾 2.5g
硫酸钠 1.0g
蒸馏水加至 100ml
此液固定作用缓慢,但颇均匀,收缩亦小。多用于媒染和硬化神经组织,在这种固定溶液中,重铬酸钾未经酸化,所以对染色质无固定作用。不适用于一般细胞学染色。除用于骨骼标本外,此液是一种不常用的固定剂。固定时间数天至数周,在固定过程中,需要每日更换新液并置暗处,固定后的组织用流水冲洗,再放入酒精中脱水。
Orth氏液(Mullr氏液+福尔马林)
配方:重铬酸钾 2.5g
硫酸钠 1.0g
福尔马林 10ml
蒸馏水 加至 100ml
一般以Mullr氏液为备用液,用前以9份Mullr氏液加1份福尔马林混合而成,因为重铬酸钾是氧化剂,福尔马林为还原剂,混合后久放即失去固定作用。
固定0.5厘米的标本块约需3-4日,每日需更换新液,标本固定后要充分水洗,然后进行脱水包埋。如固定过久,标本变脆,颜色由棕黄转变为黑色,则不能制作切片,标本经固定后如不能及时制片时,应将标本保存于福尔马林内或70%酒精中。
Orth氏液对染色质,线粒体有较好的固定效果。硫酸钠在固定液中有助于渗透作用,在一般情况下,可省去不用。
Zenker氏液(以Muller液为基液加入氯化汞在临用前再加醋酸混合而成)
配方:重铬酸钾 2.5g
硫酸钠 1.0g
氯化汞 5.0g
蒸馏水 加至 100ml
冰醋酸(临用时加入) 5ml
Muller液加入醋酸后则不能贮存,未加醋酸的溶液(ZenRer氏原液)可保存较久。此液加入冰醋酸后,与重铬酸钾作用生成铬酸,是蛋白质的良好固定剂,其穿透力迅速而均匀硬化组织能力强,经它固定后的标本利于盐基性染色剂着色,胞核和胞浆染色颇为清晰,是一种优良的常规固定剂。
Zenker氏固定液中含有两种蛋白质和三种染色质的固定剂:

福尔马林(40%甲醛液) 25ml
冰醋酸 5ml
此固定液保存性良好,渗透速度快,穿透力迅速而均匀,且很少引起收缩,不使组织变硬和变脆,固定后的组织用三色染色法着色鲜艳绚丽,过量苦味酸使组织呈黄色,但并不妨碍染色,毋须洗净除去。
此液也是皮肤组织较好的固定液,它可以软化表皮不使其变硬变脆。利于切片,对蛋白质核酸有较好的固定作用,一般固定时间为数小时至一日。
Carrnoy氏固定液
配方:无水酒精 60ml
氯仿 30ml
冰醋酸 10ml
此液穿透力非常块、固定力强,对核固定良好,并可保存糖原也用于糖类的固定。于脱氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA)的固定。一般组织固定2-3小时后即可直接投入95%酒精和纯酒精中进行脱水,因此也可作快速固定的固定剂,厚度2-9毫米的小块组织仅需15分钟即可,外检胸腹水经过离心沉淀后,将沉淀物用Carrnoy氏液固定可制作石蜡切片。
醋酸-酒精-福尔马林混合固定液
配方:福尔马林 10ml
冰醋酸 5ml
70%酒精 85ml


