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金黄色葡萄球菌A蛋白(SPA)技术
作者:未知 来源:生物秀 时间:2006-10-10

    2.作为广谱第二抗体 SPA代替抗体IgG的第二抗体,有如下优点:①SPA制备容易,性质稳定,易纯化,对人和多种哺乳动物的IgG都能应用,不受种属限制。而第二抗体的制备比较麻烦,且需多次免疫动物,在应用上要受同种属的限制;②SPA的结合力强,相当于游离抗体与抗原的结合力,对人和兔的亲和常数均为103 L/克分子,结合后对IgG的活性无影响。无论在0374456几乎均能立即结合而无需长时间的孵育,因此可以缩短试验时间,第二抗体在较长的孵育中,出现抗原分解的问题也可以得到解决;③SPA容易标上125 I、荧光素、辣根过氧化物酶、铁蛋白等,因此可与多种技术相结合;④在检查细胞上的病毒抗原时,第二抗体往往特异性不强,会非特异性地与细胞膜上的Fc受体结合。SPA分子高度均一,它不是免疫球蛋白,不受Fc受体影响,所以有较高的抗IgG特异性;⑤用第二抗体做免疫沉淀试验时,必须将抗免疫球蛋白的浓度调整至等价,才能产生最佳的沉淀作用。而用SPA菌沉淀,不受此限制,能保证彻底的沉淀;⑥SPAlgG结合是可逆的,用4mol/L尿素、4mol/L硫氰酸、盐酸(pH2.5)或鸟嘌呤盐酸盐等都可以使之重新解离。

    3.用于提取纯化IgG 利用SPAIgG的结合特性提取IgG,比常规采用硫酸铵、Sephadex柱,DEAE柱或免疫梯度离心等法要简便得多,而且纯度好。

    4.检测和提纯IgM IgM在病毒的早期诊断中具有重要意义,为了检测特异性IgM抗体,必须首先在血清中除去IgG。采用SPA菌吸附IgG是目前快速而又理想的办法,利用此法也为IgM的提纯开辟了道路。

    5.其它方面 用于免疫复合物的检测、体外激活补体功能试验、细胞表面标记以及肿瘤表面抗原的检测等。

    标准菌种
    目前国内使用的大致如下:
    1.含A蛋白的葡萄球菌菌株
    ⑴ No 1800株:系中国科学院微生物研究所保存的由上海市分离出的菌株,其SPA含量、活性及湿菌体收获量与Cowan 1株相似,且不易出现自凝现象。
    ⑵ Cowan 1株:为SPA丰富的日本引进标准株,中国科学院微生物研究所编号为ASI 1476 
    ⑶ 799型菌株:从化脓性骨科病人的骨标本中分离出含SPA丰富的菌株。
    ⑷ 丹麦1972株:由丹麦引进。
    2.不含SPA的葡萄球菌株
    ⑴ Wood 46株:由日本引进,编号为ASI 1477。
    ⑵ 乙5—株:遵义医学院保存的SPA菌株。

    (六)培养基
    常用的培养基配方如下:
    1.  配方一 
    蛋白胨                                  10.00g
    葡萄糖                                   1.00g
    氯化钠                                   3.00g
    Na2HPO4·12H2O                          2.00g
    牛肉浸液(或5%牛肉膏)                 1 000.0ml
    混合,调pH 7.8
    欲配固体培养基则另加琼脂25.00g
    2.  配方二 
    胰酶消化酪蛋白                            17.00g
    大豆胨                                      3.00g
    氯化钠                                      5.00g
    葡萄糖                                     25.00g
    Na2HPO4                                   25.00g
    混和,调pH 7.3 
    3.  配方三
     水解蛋白胨                                 10.00g
    氯化纳                                       5.00g
    牛肉膏                                       10.00g
    酵母膏                                       25.00g
    色氨酸                                       5.00mg
    半胱氨酸                                    100.00mg
    琼脂                                         40.0g
    H2O pH 7.6                              1 000.00ml

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