生物秀首页 新闻前沿 产业资讯 实验技术 仪器教程 生物考研 资源下载 生物人 物秀商城 生物论坛 图片 专业 博客 易生物 视频动画
生命科学实验中心
导航: 生物秀 > 实验 > 生化与分子 > 分子技术 > 正文
  • 倾力提供最优!
  • 生物秀实验频道
纤维素酶活力的测定
作者:阚国仕 来源:生物秀 时间:2006-9-27

    3.C1 酶活力的测定
    将5mg/mL 的原酶液稀释10~15 倍后用于测定C1 酶活力,以脱脂棉为底物。取4 支洗净烘干的20mL具塞刻度试管,编号后各加入50mg 脱脂棉,加入1.5mL 0.05MpH5.0 的柠檬酸缓冲液,并向1 号试管中加入1.5mL DNS 溶液以钝化酶活性,作为空白对照,比色时调零用。将4 支试管同时在45℃水浴中预热5~10min,再各加入适当稀释后的酶液0.5mL,45℃水浴中保温24h。取出后立即向2、3、4 号试管中各加入1.5mL DNS溶液以终止酶反应,充分摇匀后沸水浴5min,取出冷却后用蒸馏水定容至20mL,充分混匀。以1 号试管溶液为空白对照调零点,在540nm 波长下测定2、3、4 号试管液的光密度值并记录结果。
    根据3 个重复光密度的平均值,在标准曲线上查出对应的葡萄糖含量,按下式计算出C1 酶活力(U/g)。在上述条件下反应24h,由底物生成1¦Ìmol 葡萄糖所需的酶量定义为一个酶活力单位(U)。

    式中:24 为酶活力定义中的24h。
    4.CX 酶活力的测定
    将5mg/mL 的原酶液稀释5 倍后用于测定CX 酶活力,以CMC 为底物。
    取4 支洗净烘干的20mL 具塞刻度试管,编号后各加入1.5mL 0.51%CMC 柠檬酸缓冲液,并向1 号试管中加入1.5mL DNS 溶液以钝化酶活性,作为空白对照,比色时调零用。
    将4 支试管同时在50℃水浴中预热5~10min,再各加入稀释5 倍后的酶液0.5mL,50℃水浴中保温30min 后取出,立即向2、3、4 号试管中各加入1.5mL DNS 溶液以终止酶反应,充分摇匀后沸水浴5min,取出冷却后用蒸馏水定容至20mL,充分混匀。以1 号试管溶液为空白对照调零点,在540nm 波长下测定2、3、4 号试管液的光密度值并记录结果。
    根据3 个重复光密度的平均值,在标准曲线上查出对应的葡萄糖含量,按下式计算出CX 酶活力(U/g)。在上述条件下,每小时由底物生成1¦Ìmol 葡萄糖所需的酶量定义为一个酶活力单位(U)。

    5.¦Â-葡萄糖苷酶活力的测定
    取4 支洗净烘干的20mL 具塞刻度试管,编号后各加入1.5mL 0.5%水杨酸苷柠檬酸缓冲液,并向1 号试管中加入1.5mL DNS 溶液以钝化酶活性,作为空白对照,比色时调零用。将4 支试管同时在50℃水浴中预热5~10min,再各加入酶液0.5mL,50℃水浴中保温30min,取出后立即向2、3、4 号试管中各加入1.5mL DNS 溶液以终止酶反应,充分摇匀后沸水浴5min,取出冷却后用蒸馏水定容至20mL,充分混匀。以1 号试管溶液为空白对照调零点,在540nm 波长下测定2、3、4 号试管液的光密度值并记录结果。
    根据3 个重复光密度的平均值,在标准曲线上查出对应的葡萄糖含量,按下式计算出¦Â-葡萄糖苷酶活力(U/g)。在上述条件下,每小时由底物生成1¦Ìmol 葡萄糖所需的酶量定义为一个酶活力单位(U)。

    五、结果计算
    1.葡萄糖(G)标准曲线的制作(表2)
    表2 标准曲线测定数据列表

    上一页  [1] [2] [3] [4] 下一页

关于〖纤维素酶活力的测定〗的最新评论
昵称:      评分: 1分 2分 3分 4分 5分
内容:
生物秀实验频道
设为首页 | 加入收藏 | 关于我们 | 战略伙伴 | 友情链接 | 法律声明 | 广告服务 | 联系我们 | 网站地图
Copyright © 2003-2008 生物秀 (中国·生物秀科技) 版权所有 信产部备案:鲁ICP备05001831号
客服信箱:info@bbioo.com  客服电话:15800302289  客服QQ:254857951
www.bbioo.com All Rights Reserved.