B 液（0.1 mol/L 柠檬酸钠溶液）：准确称取Na3C6H5O7 · 2H2O（MW=294.12）29.412g于500mL 大烧杯中，用少量蒸馏水溶解后，移入1 000mL 容量瓶中，然后用蒸馏水定容至1 000mL，充分混匀。4℃冰箱中保存备用。
取上述A 液27.12mL，B 液22.88mL，充分混匀后移入100mL 容量瓶中用蒸馏水定容至100mL，充分混匀，即为0.05 mol/L pH4.5 的柠檬酸缓冲液。4℃冰箱中保存备用，用于测定滤纸酶活力。
（4）0.05 mol/L pH5.0 的柠檬酸缓冲液
取上述A 液20.5mL，B 液29.5mL，充分混匀后移入100mL 容量瓶中用蒸馏水定容至100mL，充分混匀。即为0.05M pH5.0 的柠檬酸缓冲液。4℃冰箱中保存备用。用于测定C1 酶活力。
（5）0.51％羧甲基纤维素钠（CMC）溶液
精确称取0.51gCMC 于100mL 小烧杯中，加入适量0.05 mol/L pH5.0 的柠檬酸缓冲液，加热溶解后移入100mL 容量瓶中并用0.05 mol/L pH5.0 的柠檬酸缓冲液定容至100mL，用前充分摇匀。4℃冰箱中保存备用，用于测定CX 酶活力。
（6）0.5％水杨酸苷溶液
准确称取0.5g 水杨酸苷于100mL 小烧杯中，用少量0.05 mol/L pH4.5 的柠檬酸缓冲液溶解后，移入100mL 容量瓶中并用0.05 mol/L pH4.5 的柠檬酸缓冲液定容至100mL，充分混匀。4℃冰箱中保存备用，用于测定¦Â-葡萄糖苷酶活力。
（7）纤维素酶液的配制
准确称取纤维素酶制剂500mg 于100mL 小烧杯中，用少量蒸馏水溶解后，移入100mL容量瓶中，用蒸馏水定容至100mL，此酶液的浓度为5mg/mL，4℃冰箱中保存备用。
四、操作方法和步骤
1．葡萄糖（G）标准曲线的制作
取8 支洗净烘干的20mL 具塞刻度试管，编号后按表1 加入标准葡萄糖（G）溶液和蒸馏水，配制成一系列不同浓度的葡萄糖溶液。充分摇匀后，向各试管中加入1.5mL DNS溶液，摇匀后沸水浴5min，取出冷却后用蒸馏水定容至20mL，充分混匀。在540nm 波长下，以1 号试管溶液作为空白对照，调零点，测定其它各管溶液的光密度值并记录结果。以葡萄糖含量（mg）为横坐标，以对应的光密度值为纵坐标，在坐标纸上绘制出葡萄糖标准曲线。
表1 葡萄糖标准曲线制作
2．滤纸酶活力的测定
取4 支洗净烘干的20mL 具塞刻度试管，编号后各加入0.5mL 酶液和1.5mL 0.05 mol/LpH4.5 的柠檬酸缓冲液，向1 号试管中加入1.5mL DNS 溶液以钝化酶活性，作为空白对照，比色时调零用。将4 支试管同时在50℃水浴中预热5～10min，再各加入滤纸条50mg（新华定量滤纸，约1cm × 6 cm），50℃水浴中保温1h 后取出立即向2、3、4 号试管中各加入1.5mL DNS 溶液以终止酶反应，充分摇匀后沸水浴5min，取出冷却后用蒸馏水定容至20mL，充分混匀。以1 号试管溶液为空白对照调零点，在540nm 波长下测定2、3、4 号试管液的光密度值并记录结果。
根据3 个重复光密度的平均值，在标准曲线上查出对应的葡萄糖含量，按下式计算出滤纸酶活力（U/g）。在上述条件下，每小时由底物生成1¦Ìmol 葡萄糖所需的酶量定义为一个酶活力单位（U）。
式中：5.56 为1mg 葡萄糖的¦Ìmol 数。（1 000/180=5.56）
