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基因组DNA文库的建立
作者:未知 来源:生物秀 时间:2006-9-25

    一、 原理
    基因组DNA 文库包括了基因组所有顺序的随机克隆片段。一个好的基因组DNA 文库的大小应足够大,以便包括所有的基因DNA 顺序。DNA 克隆片段也应足够大,其中包括整个基因、连接基因及它们稳定形式所要的侧翼顺序。为了获得高的克隆效率和较大的插入片段,λ噬菌体载体和质粒经常被使用构建基因组DNA
    文库。λ噬菌体文库易于操作,噬菌体载体上有多克隆位点。λ噬菌体能容纳10 -50 kb 插入DNA,载体类型应根据所要基因组DNA 片的大小和用途来选择。
    构建一个基因组DNA 文库的基本步骤:① 分离纯化基因组DNA ;② 切割DNA 成合适大小的片段以用于克隆;③ 载体DNA 的制备;④ 把基因组DNA 片段和载DNA 连接;⑤ 包装重组分子;⑥ 测定入噬菌体滴度;⑦ 扩增DNA 文库;⑧ 评估文的质量。

    二、材料
    1、培养基
    LB 肉汤;LB 琼脂平板;LB 顶层琼脂糖。
    2、缓冲液

    ( 5 ) TSP :
    2 mL 2 mol / L        Tris -HCl( pH 7.9 )
    10 mL 0.1mol / L    亚精胺
    10 mL 0.1mol / L    腐胺
    78 mL 水

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