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离心技术原理与类型
作者:未知 来源:生物秀 时间:2006-9-25

    (3)超高速离心机
    普通和高速离心机主要用于分离制备生物大分子物质和亚细胞成分;超速离心机有超过500000×g的离心力,能使亚细胞器分级分离,可用于分离病毒,也可用于测定蛋白质、核酸的相对分子质量等。
    根据功能不同,又可分制备性超速离心机和分析性超速离心机。
    由于转速高会产生大量的热量,因而这种离心机都附有冷冻装置,以降低转子室内温度。同时.转子是在真空下运转的,可以减小摩擦。分析性离心时,必须对固相颗粒沉降过程跟踪监测。为此,超速离心机附有一套光学系统,光路与离心管垂直,并透过离心管内的溶液,同时测定光密度或透光率,也可以检测沉降颗粒的沉降速度和移动界面。这些测定有助于对样品的状况进行分析。

    ①制备性超速离心机:
    主要由驱动和速度控制、温度控制、真空系统和转头四部分组成。
    驱动和速度控制:大多数超速离心机的驱动装置是由水冷或风冷电动机通过精密齿轮箱或皮带变速,或直接用变频马达连接到转头轴构成。由于驱动轴的直径仅仅0.476cm,这样,在旋转期间细轴可有一定的弹性弯曲,以便适应转头的轻度不平衡,而不至于引起震动或转铀损伤。利用变阻器和带有旋速器的控制器来选择转头的转速。除速度控制系统以外,还有一个过速保护系统,以防止转速超过转头最大规定转速时引起的转头撕裂或爆炸。为此目的,离心腔总是用能承受此种爆炸的装甲钢板密闭。
    温度控制:其温度控制是由安置在转头下面的红外线射量感受器直接而连续地监测转头的温度,以保证更准确更灵敏的温度调控。

    真空系统:当转速超过4000 r/min 时,空气与旋转的转轴之间的摩擦生热成为严重的问题。为了消除这种热源.超速离心机一般增添了真空系统。将离心腔密封,并通过两个串联工作的真空泵系统抽成真空。第一个工作泵与一般实验室的机械真空泵相同,它可抽真空到13.33~666Pa。一旦离心腔内的压力减低到33.33Pa 以下,水冷扩散泵也开始工作。利用这两个泵,可使真空度达到并维持在0.13~0.26Pa。在摩擦力降低的情况下,速度才有可能升高到所需的转数。

    转头:制备性超速离心机采用的转头有各种各样.一般可分为两大类:角式转头和甩平式转头。角式转头的孔穴与旋转轴心之间的角度在20~45度之间。这类转头的优点是具有较大的容量,速度较高。另一种甩平式转头则由一个转头上悬吊着6个自由活动的吊桶〔离心管套〕构成。当转头静止时,这些吊柄垂直悬挂;当转头在离心力的作用下转速达到200~800 r/min 时.吊桶即甩平到水平位置。

    这种转头主要是为了密度梯度沉降法而设计的。其主要优点是梯度物质可放在保持垂直的离心管中,而离心时管子保持水平。在水平位置沉降到离心管不同区域的样品呈现出横过离心管的带状,而不像角式转头中那样成角度。因此,当从转头中取出离心管时.不会像在角式转头中那样,沉降成分重新定位。这类转头的缺点是:形成区带所需的时间间矩长,②分析性超速离心机分析性超速离心机使用了特殊设计的转头和检测系统,以便连续地监视物质在一个离心场的沉降过程。

    分析性超速离心机的转头是椭圆形的,此转头通过一个有天性的轴联接到一个高速的驱动装置上。转头在一个冷冻的和真空的胶中旋转。转头上有2~6个装离心杯的小室,离心杯呈扇形,可上下透光。离心机中装有一个光学系统,在整个离心期间都能通过紫外吸收或折射率的变化监测离心杯中沉降着的物质。在预定的时间可以拍摄沉降物质的照片、杯中物质沉降过程中,重颗粒和轻颗粒之间形成的界面就像一个折射的透镜,在检测系统的照相底板上产生了一个”峰”,出于沉降不断进行,界面问前推进,因此峰也移动。从峰移动的速度可以得到物质沉降速度的指标。
    分析性超速离心机主要用于生物大分子的相对分子质量测定,估算样舱的纯度和检测生物大分子构象的变化等。

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