色谱柱
(1)填料：
国产：天津试剂工厂：YWG─C18H37
进口：Zorbax─ODS
(2)常用柱尺寸：长25cm，内径4.6mm
(3)注意事项：
①加流路过滤器与保护柱(予柱)：通常用3cm 短柱，内径2mm。
②避免高压冲击：进样伐快转；泵起动时要由小流量开始。
③分离条件的选择：
pH 值：
硅胶基质：pH 2.5～7.0。
聚合物填料：pH 1～13 。极端pH 的流动相能溶解硅胶。
温度：
高温下用小颗粒填料柱会引起塌陷，柱效N 下降一半：3μm 柱，＞40℃；5μm 柱，＞70℃。
④柱的保存：通常灌注纯有机溶剂保存。若用水(如凝胶柱)，则加10％叠氮化钠。
⑤净化样品：不含微粒；防止蛋白质沉淀在柱头；防止组分在固定相上保留过强。措施：先过滤样品；先做预试验(样品加入流动相中变浑否？)；用予柱除去强保留组分。若用6M NaOH 溶解的样品进样50～10μL，硅胶柱就报废。
⑥定期洗柱：甲醇、乙腈洗掉柱中强保留组分，正向或反向洗，不要流过检测器，若无效：则换不锈钢过滤片，并用同种填料加乙醇调成糊状，补平柱头，或挖去2～3mm 脏填料，重新填平(填料也可以不同种)。
⑦延长柱寿命：修补柱头；换不锈钢过滤片；冲洗柱；倒向用(柱效要下降40～60％)。
泵─往复式恒流柱塞泵
三大问题：
(1)单向伐故障：红宝石球与伐座密封不严。
原因：
①污染：气泡、微粒。
解决方法：用25mL 水、甲醇、异丙醇、二氯甲烷 依次冲洗。在稀硝酸中超声15min ，用HPLC
水洗2～3次、甲醇洗2次。
②磨损：对调红宝石球，使面密封变为线密封。
(2)密封圈故障：渗漏、垫圈碎片污染系统。表现：压力不稳、泵头漏液。通常三个月或不定期换
密封圈。拆泵头：兰宝石杆要缩至最短。
(3)气泡：用脱气后甲醇冲洗。
预防措施：
①用高质量溶剂和水作流动相。
②流动相脱气。
③每天结束时先用水洗，再用甲醇洗。若用过缓冲液：必须先水洗30～60min(1mL/ min)，再甲醇洗30min，千万不可先用甲醇冲洗，否则无机盐沉淀堵了管路。
④及时换密封圈，加油。
⑤用10mL 水、10mL 甲醇洗泵头排水孔。
⑥防止柱塞杆磨损。换新圈仍漏，则是柱塞杆被盐划伤。
进样器
(1)进样器分手动、自动两种。通常实验室用的是手动。
六通进样伐：惰性聚合物转子与陶瓷定子之间构成密封面。
内装式：针头插到伐体内的转子部位，平头，有直径0.5mm 和0.7mm 两种。完全装液法与部分装液法均可使用。
外装式：进样孔与伐有距离，部分样品留在进样管道，不被注入样品环管，因而最好使用完全装液法
(2)注意事项：
①内装式平针头决不可过长，不可超出转子面，否则将损坏进样伐。进样后可不拔出针头，进样量不限。外装式进样量要过量，进柱样品量精确度比内装式高。
②转手柄要快：＜1秒，不允许停在中间！
③用后要立即清洗：
使用了强腐蚀性溶剂：用水和有机溶剂清洗。
使用了含盐缓冲液：用后立即用水洗净进样孔和导管，否则会损坏密封面。
④针头不可过细，否则针头密封圈失效而渗漏。
检测器
检测器的作用是将浓度的变化变成电信号。常用的检测器有紫外检测器、荧光检测器、示差折光
检测器等。
(1)紫外检测器：
195～350nm 的可变波长检测器通常使用氘灯。1024个二极管的二极管阵列检测器可作吸光度、时间和波长的三维检测，画出三维立体山峰形状的图形。石英流动池为”Z”形，约8μl，光池为1mm×10mm。
注意事项：
①氘灯寿命只有 400～1000小时，要注意节灯。
②气泡：谱图上出现许多毛刺峰，是光池内有气泡，可用脱气后的甲醇或异丙醇冲洗。
③污染与堵塞：反向冲洗顺序为：50mL 无水乙醇→50mL 水→250mL 3M 硫酸→100mL 水。为防止酸喷出，可用反向负压回抽法(用注射器)。
④正确选择检测波长：通常用该样品紫外扫描吸收光谱的波峰波长。
(2)荧光检测器：将溶质样品衍生为荧光物质，检测灵敏度比紫外高10～1000倍。
(3)示差折光检测器：灵敏度较低，用于糖类样品的检测。
