所以，改变Cb 浓度，保留值k’和选择性α 都改变了，
寻找最佳的Cb 浓度就是HPLC 高效液相色谱技术的精髓所在。
例如，通常用10％～90％的甲醇/水，梯度洗脱30min，即可找出适宜的Cb 浓度。
用高浓度Cb 洗脱，可保证先将所有的峰都洗脱出来，不丢失组份，然后再调节Cb 浓度，
找到更好的分离效果，加大各组份色谱峰的分离度。甲醇降低10％，k’可降低2～3倍。
(7)反相色谱的一般规律：
7.6.3 HPLC 系统构成
HPLC 系统构成，如图2—34。
贮液器和流动相脱气
(1)贮液器：常用干净的无水甲醇试剂瓶作贮液器，并要加盖以防灰尘落入，但瓶盖与导管之间应有缝隙，若过紧会形成真空。贮液瓶内要放置烧结不锈钢过滤器，即沉子，孔径为10μm，其作用是：
①防止灰尘进入泵缸;② 作为进液导管的重物，使导管能沉在瓶底。
(2)脱气：正相色谱如非水性凝胶色谱的流动相不必脱气，反相色谱的流动相需要脱气。
①He 氦气脱气：10min 可以除去80～90％溶入的气体，但价格昂贵。
②真空脱气：这是最常用的方法，可用真空抽滤流动相的方法代替。
③超声脱气：使用方便，但只能脱气30％。
④加热回流：最彻底的脱气方法，混合流动相不能用。
(3)注意事项：
①溶剂过滤：常用0.5μm 膜过滤。HPLC 级溶剂：无微粒，无紫外吸收，已用0.2μm 膜过滤。
②贮液瓶要不定期更换，要有2～3个备用瓶，定期用酸、水、溶剂清洗。
③沉子：用三个月后必须清洗或更换，若未用沉子，则必须用0.5μm 膜过滤。
④使用混合流动相时：易产生气体，可在系统外预混合后脱气。
⑤流动相不畅的原因：管路阻塞、长了霉菌、管道空化、贮液瓶盖子太紧。解决的办法有：抬高
贮液瓶或向瓶内加压；去掉沉子；用稀硝酸洗去管道内微生物(洗前必须洗净醇类)。
