高效液相色谱(HPLC：High Performance Liquid Chromatography)是化学、生物化学与分子生物学、医药学、农业、环保、商检、药检、法检等学科领域与专业最为重要的分离分析技术，是分析化学家、生物化学家等用以解决他们面临的各种实际分离分析课题必不可缺少的工具。

高效液相色谱的优点是：检测的分辨率和灵敏度高，分析速度快，重复性好，定量精度高，应用范围广。适用于分析高沸点、大分子、强极性、热稳定性差的化合物。其缺点是：价格昂贵，要用各种填料柱，容量小，分析生物大分子和无机离子困难，流动相消耗大且有毒性的居多。目前的发展趋
势是向生物化学和药物分析及制备型倾斜。

基本原理
HPLC 是利用样品中的溶质在固定相和流动相之间分配系数的不同，进行连续的无数次的交换和分配而达到分离的过程，如图2－27。

按照分离机制不同，高效液相色谱可分为：
高效分配色谱（分配系数 ），高效亲和色谱（亲和力），高效吸附色谱（吸附力），高效离子交换色谱（离子交换能力），高效凝胶色谱（分子大小而引起的体积排阻色谱）。
高效分配色谱又可分为：
正相色谱：固定相为极性，流动相为非极性。
反相色谱：固定相为非极性，流动相为极性 (用的最多，约占60～70％)。
(1)固定相(柱填料)
固定相分为两类，一类是使用最多的微粒硅胶，另一类是使用较少的高分子微球。后者的优点是强度大、化学惰性，使用pH 范围大，pH=1～14，缺点是柱效较小，常用于离子交换色谱和凝胶色谱。
最常使用的全孔微粒硅胶(3～10μm)是化学键合固定相硅胶，这种固定相要占所有柱填料的80％。它是通过化学反应把某种适当的化学官能团(例如各种有机硅烷)，键合到硅胶表面上，取代了羟基(－OH)而成。它是近代高效液相色谱技术中最重要的柱填料类型。
使用微粒硅胶要特别注意它的使用pH 范围是 2～7.5，若过碱(＞pH7.5)，硅胶会粉碎或溶解；若过酸(＜ pH2＝键合相的化学键会断裂。
键合相使用硅胶作基质的优点是：硅胶的强度大；微粒硅胶的孔结构和表面积易人为控制。化学稳定性好。重要的键合相是：硅烷化键合相，它是硅胶与有机硅烷反应的产物。


图 2—28 最常用的硅烷化键合相键型

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