一、实验目的
1.了解转氨酶在生物体中的生理功能。
2.掌握转氨酶活性测定的原理和方法。
二、实验原理
转氨酶是生物体内一类非常重要的酶，其能催化α–氨基酸的α–氨基与α–酮酸的α–酮基之间的相互转化，使生成新的氨基酸与新的酮酸。这一过程称为转氨基作用。转氨作用在生物体蛋白质的合成与分解中间代谢过程中，在糖、脂及蛋白质三大物质代谢的相互联系、相互制约及相互转变过程中至关重要。
在动物机体中活力最强、分布最广的转氨酶有两种：一种为谷氨酸草酰乙酸转氨酶(简称GOT)，另一种为谷氨酸丙酮酸转氨酶(GPT)。它们的催化反应如下：
此反应最终产物是丙酮酸，丙酮酸可与2，4—二硝基苯肼反应，形成丙酮酸二硝基苯腙，在碱性溶液中显棕红色。再与同样处理的丙酮酸标准液进行比色，计算出丙酮酸含量，以此测定转氨酶的活力。
丙酮酸 + 2，4—二硝基苯肼→丙酮酸二硝基苯腙(棕红色)+ 水
转氨酶的活性单位可表示为：每毫升血清与基质在37℃下作用60分钟，生成1μmol 丙酮酸为1个单位。
三、仪器、原料和试剂
仪器
分光光度计、水浴锅、试管及试管架、移液管等。
原料
血清
试剂
1. 0.1mol/L 磷酸盐缓冲液(pH7.4)：称取磷酸氢二钾13.97g 和磷酸二氢钾2.69g，溶于蒸馏水，定容至1000 mL。
2. GPT 基质液：称取a-酮戊二酸29.2 mg 及DL-丙氨酸1.78g，溶于pH7.4的磷酸盐缓冲液20mL中，溶解后再加缓冲液70mL，并移入100mL 容量瓶内。加1mol/L 的NaOH 溶液0.5mL，校正pH 至7.4。
再以pH7.4的磷酸缓冲液定容至100mL。贮存于冰箱备用，可用1周。
3. GOT 基质液：称取a-酮戊二酸29.2 mg 及DL-天冬氨酸2.66g，溶于pH7.4的磷酸盐缓冲液30mL中，溶解后再加缓冲液60mL，并移入100mL 容量瓶内。加1mol/L 的NaOH 溶液0.5mL，校正pH 至7.4。再以pH7.4的磷酸缓冲液定容至100mL。贮存于冰箱备用，可用1周。
