2.点样
按照图中所示点样位置，将样品及已知糖混合液分别点在两块薄层板上。点样量约20～30μL，分次滴加．使点扩散后其直径不超过5mm。点样过程中．可用吹风机使样品干燥，也可自然干燥。
3.展层
将点好样品的薄层板置于密闭的容器或薄层层析缸中，用新配制的展开剂乙酸乙酯：甲醇：乙酸：水＝12：3：3：2(体积比)，采用倾斜上行法，如图3—4，将薄层板的下端浸在展开剂中0.3～0.5cm，展开剂借毛细管作用，经过硅胶H 层的细颈部，由下而上扩展。用此种形状的薄层展开的时间较一般的薄层稍长，这是由于点样处狭窄通过溶剂少的缘故。一般至展开剂距薄层板的上端约1cm时取出。放置通风处自然干燥，或用吹风机吹干。
图3—4 倾斜上行展层法示意图
1.玻璃盖 2.薄层层析板 3.支撑物 4.层析缸 5.溶剂
4.显色
在除去溶剂后的薄层上，进行喷雾显色。喷雾时要求喷出的雾点细而均匀。糖的显色剂种类很多，可根据实验室的条件选择使用。下面仅介绍三种显色剂。
(1)苯胺—二苯胺—磷酸试剂：喷雾后于85℃烘烤10min，各种糖显不同颜色。
(2)茴香醛—硫酸试剂：喷雾后于100～105℃烘烤至显色，最低检出量为0.05μg，各种糖显不同颜色，此试剂对硼酸处理过的硅胶薄层显色灵敏度较差。
(3)1，3—二羟基萘酚—硫酸试剂：在110℃预热的薄层上喷雾，几分钟后在白色背景上显出不同颜色的斑点，若是喷雾后再加热，色点变深，底色也变深。
图3—5 糖的径向薄层层析图谱(示意图)
薄层：硅胶H1；显色剂：本胺—二苯胺—磷酸试剂；展开剂：乙酸乙酯：甲醇：乙酸：水=12：3：3：2(v/v)
5.样品中糖的定性鉴定：
薄层显色后，参考显色斑点的颜色，相对位置及Rf 值，Rf 值的定义是：从样品层析的起点(原点)到层析斑点中心的垂直距离与从原点到溶剂流动的前沿的垂直距离的比值。
将样品图谱与标准图谱相比较，确定样品中含有那几种糖，如图3—5和表3—1，并根据观察，用”十”、”十十”、”十十十”等表示各种糖的相对含量。
为得到确切的结果，应在相同条件下重复上述酶层层析实验，应得到重复性的结果。
表 几种糖的Rf 值及颜色
