一、实验目的
1.掌握磷钼酸比色法测定血糖的原理及方法。
2.学会制备无蛋白血滤液。

二、实验原理
葡萄糖的醛基具有还原性，与碱性铜试剂混合加热后，被氧化成羧基，而碱性铜试剂中的二价铜(Cu²⁺)则被还原成红色的氧化亚铜(Cu₂O)沉淀，氧化亚铜又可使磷钼酸还原，生成钼蓝，使溶液呈蓝色，其蓝色的深度与血滤液中葡萄糖的浓度成正比，可用比色法于620nm 下测定之。
测定血糖含量时必须先除去其中的蛋白质，制成无蛋白滤液，再行检验。向抗凝血(如加入草酸钾的血液)中加入钨酸钠、硫酸锌、氢氧化锌及三氯乙酸等均可制得无蛋白滤液，现常用钨酸法。钨酸钠与硫酸作用，生成钨酸，可使血红蛋白等凝固、沉淀、离心或过滤除去沉淀，即得无蛋白滤液，此种滤液还 适用于测定非蛋白氮、肌酸和尿酸等。
Na₂WO₄+H₂SO₄ → H₂WO₄+Na₂SO₄
钨酸钠                        钨酸

三、仪器、实验材料和试剂
仪器
奥氏吸量管(1mL)、小漏斗、吸量管(1mL、10mL)、锥形瓶(25mL)、血糖管、分光光度计、试管和试管架、恒温水浴箱(100℃ C)、煤气灯或电炉。
实验材料
抗凝血
试剂
1. 草酸钾粉末(A.R)
2. l0％钨酸钠溶液：此溶液应为中性或弱碱性．否则蛋白沉淀不完全，其校正方法是取此溶液10mL，加入0.05mol/L，硫酸溶液0.4mL，再加人1％酚酞指示剂1滴，溶液应呈粉红色，若呈紫红色，可加人0.05mol/L 硫酸溶液，若呈黄色，需加入0.1mol/L 氢氧化钠溶液，直到出现不褪色的粉红色的中性反应为止，计算出应加的酸或碱的量。
3. 3mol/L 硫酸溶液
4. 葡萄糖标准液
储存液：称取1000mg 恒重过的葡萄糖(A .R)，溶于水，稀释到100mL，其质量浓度为10g/L。
应用液：取1mL 储存液置于100mL 容量瓶中，用苯甲酸稀释到刻度，质量浓度为0.1g/L。
5. 碱性铜试剂在400mL 蒸馏水中加人40g 无水碳酸钠；在300mL 蒸馏水中加入7.5g 酒石酸，在200mL 蒸馏水中加入4.5g 硫酸铜结晶，分别加热使溶解，冷却后将洒石酸溶液倾入碳酸钠溶液中．混合液移入1000mL 容量瓶中，再将硫酸铜溶液倾入并加蒸馏水至刻度。此试剂可于室温下长期保存。
如有沉淀产生，需过滤后方可使用。
6. 磷钼酸试剂在烧杯内加入钼酸70g、钨酸10g、10％氢氯化钠溶液400mL 及蒸馏水400mL，混合后置于100℃恒温水浴箱中保温20～40min，驱去钼酸中可能存在的溴，如图3－1。冷却后加入250mL浓磷酸(85％)，混匀，稀释至1000mL。
7. 0.25％苯甲酸溶液

四、操作步骤
(一)钨酸法制备1:10全血封锁蛋白滤液
用奥氏吸量管①吸取1mL，混匀的抗凝血(每L 血液含2g 草酸钾)，擦去管外血液。将管插到25mL锥形瓶的瓶底，缓缓放入②锥形瓶内。
加入7mL 蒸馏水，充分混匀，使完全溶血后，再加入1/3mol/L 硫酸溶液1mL，随加随摇，再加入1mL10％钨酸钠溶液，随加随摇。加完后充分摇匀，放置5～10min．待沉淀由鲜红色变为暗棕色③，即用优质不含氮的干滤纸过滤，在漏斗上盖一表面皿，以减少Cu 与空气的接触，如此制得的无蛋白滤液每mL 相当干1/10mL 全血。
 

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