外水体积是指凝胶柱中凝胶颗粒周围空间的体积，
也就是凝胶颗粒间液体流动相的体积。
内水体积是指凝胶颗粒中孔穴的体积，
凝胶层析中固定相体积就是指内水体积。
基质体积是指凝胶颗粒实际骨架体积。
而柱床体积就是指凝胶柱所能容纳的总体积。
洗脱体积
凝胶层析中的几种洗脱峰，如图2－25。
柱床体积Vt 可以通过加入一定量的水至层析柱预定标记处，然后测量水的体积来测定。外水体积Vo 可以通过测定完全排阻的大分子物质的洗脱体积来测定，一般常用蓝色葡聚糖-2000作为测定外水体积的物质。因为它的分子量大(为200万)，在各种型号的凝胶中都被排阻，并且它呈蓝色，易于观察和检测。
(2)分配系数
分配系数是指某个组分在固定相和流动相中的浓度比。对于凝胶层析，分配系数实质上表示某个组分在内水体积和在外水体积中的浓度分配关系。在凝胶层析中，分配系数通常表示为：
对于某一型号的凝胶，在一定的分子量范围内，各个组分的Kav 与其分子量的对数成线性关系：
Kav ＝－b lg MW＋c
其中b、c 为常数，MW表示物质的分子量。另外由于Ve 和Kav 也成线性关系，所以同样有：
Ve ＝－b' lg MW＋c'
其中b'、c'为常数。这样通过将一些已知分子量的标准物质在同一凝胶柱上以相同条件进行洗脱，分别测定Ve 或Kav，并根据上述的线性关系绘出标准曲线，然后在相同的条件下测定未知物的Ve或Kav，通过标准曲线即可求出其分子量，这就是凝胶层析测定分子量的基本原理。
