Ⅰ电泳后备蛋白质的位置 Ⅱ 加抗体后双扩散的情况 Ⅲ 双扩散结果免疫电泳用途主要有：①纯化抗原或抗体的纯度鉴定；②血清蛋白成分的分析．有助于原发性补体组分及免疫球蛋白缺陷(如先天性无丙种球蛋白血症)的诊断；③浆细胞恶病质，如多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症及重链病等的鉴别诊断。
对流免疫电泳
对流免疫电泳是将双向免疫扩散与电泳相结合的一种技术。在pH8.6的缓冲液中，蛋白质抗原带负电荷向正极泳动；而抗体大部分属于IgG，由于分子量大，且暴露的极性基团较少，在离子琼脂中泳动缓慢，同时受电渗作用的影响向负极泳动(电渗是指在电场中液体对于一个固定固体的相对移动。琼脂是一种酸性物质，在碱性溶液中带负电荷，而与它接触的溶液带正电荷，因此液体向负极泳功，
产生电渗)。在抗原抗体相遇的最适比例处形成乳白色沉淀线。由于电场的作用，限制了抗原、抗体的自由扩散，而使其定向泳动，因而增加了试验的灵敏度，并缩短了反应时间。
对流免疫电泳主要用于：①各类蛋白的定性和半定量测定；②某些病原微生物感染和寄生虫病的快速诊断(如流行性脑脊髓膜炎、肺吸虫病等)。
火箭免疫电泳
火箭免疫电泳是将单向免疫扩散和电泳相结合的一种定量检测技术。电泳时，含在琼脂凝胶中的抗体不发生移动，而在电场的作用下促使样品孔中的抗原向正极泳动。当抗原与抗体分子达到适当比例时，形成一个状如火箭的不溶性免疫复合物沉淀峰。峰的高度与检样中的抗原浓度呈正相关。因此，当琼脂抗体浓度固定时，以不同稀释度标准抗原泳动后形成的沉淀峰为纵坐标，抗原浓度为横坐标，绘制标准曲线。根据样品的沉淀峰长度即可计算出待测抗原的含量；反之，当琼脂中抗原浓度固定时，便可测定待检抗体的含量(即反向火箭免疫电泳)。火箭免疫电泳可定量检测血清中某一蛋白含量(如AFP、IgG、C3、C2裂解产物及外分泌物中IgA的含量等)。
免疫固定电泳
免疫固定电泳是将待检的混合抗原先在载体上进行区带电泳，使不同蛋白质由于所带净电荷不同，不同带电微粒或分子的电泳迁移率也各异而进行分离，然后直接用抗血清作用于被组分的蛋白质，进行抗原抗体反应，使抗原在电泳位置上被免疫固定。此法实质上是常规免疫电泳的一种衍生方法。免疫固定后的区带为单—免疫复合物沉淀带，与同时电泳而未经免疫固定的标本比较，可判明该蛋白为何种成分，以对样品中所合成成分及其性质进行分析、鉴定。
交叉免疫电泳
又称双向火箭免疫电泳，由两次连续电泳组成。第一次电泳时，样品中不同的蛋白质在琼脂凝胶中依据各自的迁移率而被分开，随后，在琼脂凝胶板一侧倾注含多价抗体的琼脂糖，再进行与原电泳方向垂直的第二次电泳，使各个已分离的抗原成分与凝胶内的相应抗体形成独立的火箭峰。由于第二次电泳的方向呈90°角改变，沉淀峰不会出现重叠。峰的位置取决于各种蛋白的迁移率。此法比经典的免疫电泳更优越，分辨力更高，且有利于各蛋白组分的比较，既能用于定性分析，也可用于定量测定。
等电聚焦电泳
等电聚焦电泳是根据两性物质等电点(pI)的不同而进行分离的，它具有很高的分辨率，可以分辨出等电点相差0.01的蛋白质，是分离两性物质如蛋白质的一种理想方法。等电聚焦的分离原理是在凝胶中通过加入两性电解质形成一个pH 梯度，两性物质在电泳过程中会被集中在与其等电点相等的pH区域内，从而得到分离。
两性电解质是人工合成的一种复杂的多氨基－多羧基的混合物。不同的两性电解质有不同的pH梯度范围，既有较宽的范围如pH＝3～10，也有各种较窄的范围如pH＝7～8。要根据待分离样品的情况选择适当的两性电解质，使待分离样品中各个组分都在两性电解质的pH 范围内，两性电解质的pH 范围越小，分辨率越高。
等电聚焦多采用水平平板电泳，也使用管式电泳。由于两性电解质的价格昂贵，使用1～2 mm 厚的凝胶进行等电聚焦价格较高。使用两条很薄的胶带作为玻璃板间隔，可以形成厚度仅0.15 mm 的薄层凝胶，大大降低成本，所以等电聚焦通常使用这种薄层凝胶。由于等电聚焦过程需要蛋白质根据其电荷性质在电场中自由迁移，通常使用较低浓度的聚丙烯酰胺凝胶(如4％)以防止分子筛作用，也经常使用琼脂糖，尤其是对于分子量很大的蛋白质。制作等电聚焦薄层凝胶时，首先将两性电解质、核黄素与丙烯酰胺贮液混合，加入到带有间隔胶条的玻璃板上，而后在上面加上另一块玻璃板，形成平板薄层凝胶。经过光照聚合后，将一块玻璃板撬开移去，将一小薄片湿滤纸分别置于凝胶两侧，连接凝胶和电极液(阳极为酸性如磷酸溶液，阴极为碱性如氢氧化钠溶液)。接通电源，两性电解质中不同的等电点的物质通过电泳在凝胶中形成pH 梯度，从阳极侧到阴极侧pH 值由低到高呈线性梯度分布。
而后关闭电源，上样时取一小块滤纸吸附样品后放置在凝胶上，通电30 min 后样品通过电泳离开滤纸加入凝胶中，这时可以去掉滤纸。最初样品中蛋白质所带的电荷取决于放置样品处凝胶的pH 值，等电点在pH 值以上的蛋白质带正电，在电场的作用下向阴极移动，在迁移过程中，蛋白质所处的凝胶的pH 值逐渐升高，蛋白质所带的正电逐渐减少，到达pH＝pI 处的凝胶区域时蛋白质不带电荷，停止迁移。同样，等电点在上样处凝胶pH 以下的蛋白质带负电，向阳极移动，最终到达pH＝pI 处的凝胶区域停止。可见等电聚焦过程无论样品加在凝胶上什么位置，各种蛋白质都能向着其等电点处移动，并最终到达其等电点处，对最后的电泳结果没有影响。所以有时样品可以在制胶前直接加入到凝胶溶液中。使用较高的电压(如2000V，0.5mm 平板凝胶)可以得到较快速的分离(0.5～1小时)，但应注意对凝胶的冷却以及使用恒定功率的电源。凝胶结束后对蛋白质进行染色时应注意，由于两性电解质也会被染色，使整个凝胶都被染色。所以等电聚焦的凝胶不能直接染色，要首先经过10％的三氯乙酸的浸泡以除去两性电解质后才能进行染色。
等电聚焦还可以用于测定某个未知蛋白质的等电点，将一系列已知等电点的标准蛋白(通常pI 在3.5～10之间)及待测蛋白同时进行等电聚焦。测定各个标准蛋白电泳区带到凝胶某一侧边缘的距离对各自的pI 值作图，即得到标准曲线。而后测定待测蛋白的距离，通过标准曲线即可求出其等电点。
