π→π*跃迁：此类跃迁所需能量较小，吸收波长在紫外区的200～300 nm，不饱和烃、共轭烯烃及芳香烃均可发生这类跃迁，氨基酸、蛋白质与核酸均含有大量共轭双键，因而200～300 nm 的紫外吸收测定，在生化实验技术中有极广泛的用途。
若逐渐改变照射某物质的入射光的波长，并测定物质对各种波长光的吸收程度(吸光度”A”或光密度”OD”)或透射程度(透光度”T”)，以波长λ 作横坐标，”A”或”T”为纵坐标，即为该物质的吸收光谱曲
线。
由图2—12可以看出吸收光谱的特征：
①曲线上”A”处称最大吸收峰，它所对应的波长称最大吸收波长，以λmax 表示。
②曲线上”B”处有一谷，称最小吸收，它所对应的波长，称最小吸收波长，以λmin表示。
③曲线上在最大吸收峰旁边有一小峰”C”，称肩峰。
④在吸收曲线的波长最短的一端，曲线上”D”处，吸收相当强，但不成峰形，此处称为末端吸收。λmax 是化合物中电子能级跃迁时吸收的特征波长，不同物质有不同的最大吸收峰，所以它对鉴定化合物极为重要。吸收光谱中，λmax 、λmin、肩峰以及整个吸收光谱的形状决定于物质的性质，其特征随物质的结构而异，所以是物质定性的依据。
图2－12 吸收光谱曲线
测定某物质的紫外吸收光谱的曲线，可与已知标准的紫外光谱图相对照，对照时须注意测定的条件，如溶剂、浓度等。常用标准的紫外吸收光谱是萨德勒研究实验公司编制的”Sadtler”紫外标准图谱集，到七十年代末为止已收集28585个化合物紫外光谱图，此外还有药物和非极性溶剂紫外光谱图2000多幅。由于化合物紫外吸收峰较少，而且峰形都很宽，不象红外光谱是许多指纹峰，所以在用紫外吸收光谱进行化合物定性鉴定时，应注意：化合物相同，其紫外光谱应完全相同；但是紫外光谱相同，不一定化合物就相同，可能仅是存在某些相同的发色团或基团，因此在鉴定时应与红外光谱相结合。
由于电子跃迁的同时也引起分子的转动和振动光谱，要把电子跃迁和分子振动、转动的跃迁完全分开是不可能的，因此我们常见的紫外吸收光谱是由一个或几个宽的吸收谱带所组成。紫外光谱中常用的术语有发色团、助色团、增色效应和减色效应。
发色团：凡是与饱和碳氢化合物连接能引起n→π*、π→π*、 n→σ* 等电子跃迁的基团称为发色团。
例如：C＝C、C＝O 等发色团。
助色团：助色团是一些具有非共价键的基团(如-OH、-NH2、-SH 等)。这些基团在波长＞200 nm处没有吸收，当它与发色团相连时，使发色团的吸收带向长波移动，称为红移(或浅色效应)，红移的同时吸收带的强度增加。若助色团与发色团相连，产生 an* 跃迁，使吸收波长向短波移动，称为兰移(或深色效应)。增色效应(hyperchromic effect):核酸变性或降解，使得DNA 或RNA 溶液对紫外光的吸收明显增加，即 ε 值(吸光系数或称消光系数)显著升高，此现象称为增色效应。此效应是由于碱基之间电子相互作用的改变所致，通常在260nm 处测量。
减色效应(hypochromic effect):在一定的条件下，变性的核酸又可以复性，此时ε 值又明显减少，回复到原来的核酸分子ε 值较低的水平，即此时DNA 或RNA 溶液的紫外光吸收显著降低，此现象称为减色效应，此效应也是由于碱基之间电子相互作用的变化所引起的，通常在260nm 条件下测量。
光吸收定律：
朗伯—比尔(Lambert－beer)光吸收定律：
A＝－lgT＝εbc
A—吸光度，又称光密度”OD”； T—透光度， T＝I/I。；
I。—为照射到吸收池上的光强； I—为透过吸收池的光强；
ε—摩尔吸光系数或克分子吸光系数(L·mol－1·cm－1)；
b—样品光程(cm)，通常使用1.0cm 的吸收地，b=1cm；
C—样品浓度(mol/L)。
由上式可以看出：吸光度A 与物质的摩尔吸光系数”ε”和物质的浓度”C”成正比
