3 、高效价噬菌体的制备
刚分离纯化所得到的噬菌体往往效价不高,需要进行增殖。将纯化了的噬菌体滤液与液体培养基按l : 10 的比例混合,再加入大肠杆菌悬液适量(可与噬菌体滤液等量或1/2 的量),培养,使增殖,如此重复移种数次,最后过滤,可得到高效价的噬菌体制品。
4、噬菌体是效价测定
(1)稀释噬菌体
(a)将4 管含有0.9 毫升液体培养基的试管分别标写10-3,10-4,10-5 和10-6。
(b)用1 毫升无菌吸管吸0.1 毫升10-2 大肠杆菌噬菌体,注入10-3 的试管中,旋摇试管,使混匀。
(c)用另一支无菌吸管从吸0.1 毫升10-3 大肠杆菌噬菌体,注入10-4 的试管中,旋摇试管,使混匀。余类推,稀释到10-6 管中,混匀,如图所示。

(2)噬菌体与菌液的混合
(a)将 5 支灭菌空试管分别标写10-4,10-5,10-6,10-7 和对照
( b )用吸管从 10 -3 噬菌体稀释管吸0.1 毫升加人 10-4 的空试管内,用另一支吸管从 10-4 稀释管内吸0.1 毫升 时加人10-5 空试管内,如图 1 直至 10-7 管。
( C)将大肠杆菌培养液摇匀,用吸管取菌液 0.9 毫升加人对照试管内,再吸0.9 毫升假如10-7 试管,如此从最后一管加起,直至 10-4 管,各管均加 0.9 毫升大肠杆菌培养液。
(D)将以上试管旋摇混匀。
(1)将5 管上层培养基融化,标写10-4,10-5,10-6,10-7 和对照,使冷却至48℃,并放入48℃水浴箱内。
(2 )分别将 4 管混合液和对照管对号加入上层培养基试管内。每一管加入混合液后,立即旋摇混匀。
(3)混合液加入上层培养基中
(4)接种了的上层培养基倒入底层平板上 ( a )将旋摇均匀的上层培养基迅速对号倒入底层平板上,放在台面上摇匀,使上层培养基铺满平板。 ( b )凝固后,放置37℃培养
(5) 观察平板中的噬菌斑 将每个稀释度的噬菌斑数目记录于实验报告表格内,并选取30-300 个噬菌斑的平板计算算每毫升未稀释的原液的噬菌体数(效价)。噬菌体效价=噬菌斑数 x 稀释倍数 x 10
五、实验报告
l 、结果
绘图表示平板上出砚的噬菌斑并计算每毫升未稀释的原液的噬菌体数


