一、实验目的
1. 掌握考马斯亮蓝R250 对植物细胞骨架染色的方法。
2. 通过对洋葱内皮细胞的处理，掌握植物细胞骨架的制备方法与显微形态观察。
 
二、实验原理
细胞骨架(cytoskeleton)，是细胞内以蛋白质纤维为主要成分的网络结构，根据蛋白质纤维的直径、组成成分和组装结构的不同可分为微丝、微管和中等纤维。细胞骨架对于维持细胞的形态结构及细胞运动、物质运输、能量转换、信号传导和细胞分裂等有重要的作用。本试验采用去垢剂TritonX-100 的缓冲液处理植物材料时，可将细胞的膜结构和大部分蛋白质抽提掉，但细胞骨架系统的蛋白却被保存下来，后者用考马斯亮蓝R250 染色，在光学显微镜下可见一种网状结构。
 
三、实验用品
(一)材料        洋葱
（二）器材      显微镜、载玻片、滴管、擦镜纸、PH 计
（三）试剂
1. 0.01mol/L 磷酸盐缓冲生理盐水(PBS)
0.2mol/L Na₂HPO₄- NaH₂PO₄缓冲液（PB，PH7.3）         50ml
0.15mol/L NaCl
双蒸馏水加至1000ml
2. PB
0.2mol/L Na₂HPO₄                                  77ml
0.2mol/L NaH₂PO₄                                  23ml
3. M-缓冲液
咪唑(PH 6.7)                                     50mmol/L
KCl                                              50mmol/L
MgC1₂                                             0.5mmol/L
EGTA                                             1mmol/L
EDTA                                             0.1mmol/L
巯基乙醇                                        1mmol/L
甘油                                            4mmol/L
用1mol/L HCl 调pH 至7.2。
4. 1%的Triton X-100/M-缓冲液
5. 0.2%考马斯亮蓝R250 染液
甲醇                                            46.5ml
冰醋酸                                          7ml
蒸馏水                                          46.5ml
6. 3%戊二醛- PB 溶液（PH7.3）
 
四、实验操作见图4-4

五、实验建议
1. 用去垢剂TritonX-100 的缓冲液处理材料时，应控制在30min 左右。
2. 每一次加液或染色后，应用PBS 洗2 次，并用滤纸吸干