三．从10ml全血中提取基因组DNA的操作步骤
设备要求：离心机能放入50ml的离心管。由于离心速率低，因而离心时间长一些。
⑴裂解1： 取10ml抗凝的全血放入到50ml的离心管中，加入10ml裂解液1。上下翻转，使沉淀物分散，在振摇机中振摇10分钟, 放入离心机中离心, 离心速率为2200rpm , 10min.. 可见离心管底部有血色沉淀. 倒掉上层液，重复此裂解步骤一次，这次仍然是加入10ml裂解液1。 最后用移液管吸净所有上清液弃去, 以使离心管底部的血色沉淀不再残留有裂解液1。
⑵裂解2: 在上面离心管中加入10ml裂解液2。在振摇机中振摇10分钟, 务必使沉淀物分散, 放入离心机中离心, 离心速率为2200rpm , 10 min.. 可见离心管底部有少量灰色沉淀. 倒掉上层液, 留下沉淀.。重复此提取步骤一次，这次仍然是加入10ml裂解液2。 最后用移液管吸净所有上清液弃去, 以使离心管底部的灰白色沉淀不再残留有裂解液2。
⑶ 消化： 吸取蛋白酶K 100ul ( = 2mg )加入到上面的离心管中，用移液管尖头反复吹打， 使蛋白酶K与沉淀物均匀接触后， 加入1.6ml消化液，振摇3分钟, 放入58℃水浴中消化1小时。消化其间，要取出离心管用手拍打一下，帮助内容物均匀消化。最后可见澄明的消化液体。
⑷ 纯化：在上面的消化液体中加入600ul纯化液， 混匀后， 离心，速率为2800rpm, 15min， 把上清液吸出放入到装有5ml无水乙醇的带盖的管中，轻轻上下翻转10次， 可见絮状DNA析出。用带钩的玻璃棒挑起絮状DNA放入到1000ul的 70%乙醇中耒回漂洗20次，钩出DNA，在空气中凉干一下后放入到500ul弥散液中。把DNA弥散液保存于4 ℃，过夜， 使之充分弥散。提取完毕。
如要立即用此DNA做PCR实验，把DNA弥散液放在58℃水浴中，保温30分钟, 用手指拍打离心管子，使DNA弥散后使用。提取完毕。
附：如从5ml全血中提取DNA，只需按比例减少各步骤的试剂用量。
四．从口腔两颊刮物提取DNA的操作步骤
DNA的浓度一般是3-23ug/ml, OD值为1.7-1.9。
⑴ 裂解1: 吸取600ul PBS 到1.5ml离心管中, 剪入刮颊刷. 旋转脉动15秒. 加入400ul裂解液1. 旋转脉动15秒后放入离心机中离心, 8000rpm , 1 min.. 倒掉上层液。重复此提取步骤一次，这次是加入1000ul裂解液1。 最后用移液管吸净所有上清液弃去, 以使离心管底部的沉淀不再残留有裂解液1。
⑵ 裂解2: 在上面离心管中加入1000ul裂解液2. 旋转脉动15次后放入离心机中离心, 8000rpm , 1 min.. 可见离心管底部有微量沉淀. 倒掉上层清液。重复此裂解步骤一次，这次仍是加入1000ul裂解液2。 最后用移液管吸净所有上清液弃去, 以使离心管底部的沉淀不再残留有裂解液2。刮刷留在离心管内。
⑶ 消化: 吸取20ul 蛋白酶液( = 0.4mg)加入到上面的离心管中, 旋转脉动一下, 再加入160ul消化液, 又旋转脉动一下后, 放入58℃水浴中消化15分钟. 取出后可见澄清的消化液。离心8000rpm , 20秒，把盖上的液滴回落到管中. 然后轻轻取出刮刷去掉.
⑷ 纯化: 加入60ul纯化液到上面离心管中，旋转脉动一下, 放入离心机中离心，15000rpm, 1min。 把上清液吸出放入到240ul无水乙醇中 轻轻上下翻转10次, 可见云状DNA析出, 并浮于液面..
⑸ 收集: 把上液倒入微型过滤器中, 滤器放入离心机内 离心: 8000rpm , 1min.. DNA便附着在滤漠上. 弃去收集管中的滤液。
⑹ 吸取50ul 70%.乙醇于滤柱内. 离心 8000rpm , 1 min. 弃去收集管中的滤液。再次离心,离心速率为15000rpm , 1 min.，使吸附在滤膜上的DNA不再附有乙醇。
⑺ 回收DNA： 把上面附着DNA的滤柱放在一个干净的1.5ml离心管中. 吸取100ul 弥散液轻轻放入滤膜的表面(弥散液事先要温热到58℃, 弥散效果更好), 静置10分钟. 离心 8000rpm , 1 min. 含DNA的弥散液便滤入到干净的1.5ml 离心管中。提取完毕。
