一、实验目的:
通过对材料的固定、脱水透明、浸蜡、包埋、切片等实验操作,了解石蜡切片的基本过程,掌握石蜡切片的制作方法。
二、实验准备:
1.用具 小标本瓶,指管,眼科镊子,蜡杯,载玻片,毛笔,蜡铲,刀片,量筒(10)毫升,漏,滴管,酒精灯,小木块,切片木框,切片盒,吸水纸,标签纸,切片刀,熔蜡箱,展片台,真空泵,解剖针。
2.器皿的清洗
指管的清洗:切片所用的载玻片必须洗得很干净,否则切片容易脱落。新的载玻片用洗液浸泡半天取出,用自来水冲洗后,用纱布擦干净,放入盒内备用。擦拭时应捏住玻片两端的边缘操作,手指勿与玻片的表面接触,以免手指上的脂肪沾污玻片。
盖玻片的擦洗:新的盖片可放入95%酒精内浸泡数十分钟,或用洗液浸泡。注意盖片要一片片投入,使盖片的二面都接触到液体,浸泡后,水冲洗干净后再放入95%酒精中浸泡,然后用干净白布擦拭。擦拭时应注意,手指不能接触玻面,应以左手拇指和食指夹持盖片,右持布趁酒精未干时,一一擦拭之。
3.实验需用药品及其配制
70%、85%、95%、100%的酒精,
二甲苯, 甘油蛋白,
固定液, 石蜡。
1各种浓度酒精配制
实验室常以95%酒精来配制各种低浓度的酒精,因100%纯酒精系由95%酒精再蒸馏而成,价格昂贵,一般不用于稀释。
配制方法:
配70%酒精时,可取95%酒精70毫升再加入蒸馏水25毫升即得。一般遵照以下原则:无论用任何浓度的酒精稀释时,即稀释多大浓度就取多少毫升的酒精,然后用蒸馏水加至该酒精原有浓度即可。
2固定液的配制
采用卡诺氏醋酸酒精固定液,醋酸用冰醋酸,酒精用纯酒精,体积比为醋酸:酒精=1:3。注意须现配现用。
取鸡蛋的蛋白加入等量的甘油搅拌混合,至均匀为止。加入约为1%量的麝香酚小块,借以防止微生物的侵入和腐败。放入冰箱备用。
三、实验材料:蚕豆根尖或洋葱根尖等。
四、实验步骤:
取材固定 发芽的蚕豆,当其根尖长到一粒米大小时,用刀片切下来,立即投入盛有固定液体的标本瓶中,贴上标签,注明固定日期、固定液名称。固定4—12小时。固定剂的用量一般为材料的10—15倍或稍多,同一标本管中的材料不宜太多,因组织在固定过程中,水分或其他溶解物渗出后会影响固定剂的浓度。卡诺固定液渗透力及凝固作用很强,是一种比较激烈的固定液适宜固定DNA和RNA。脂肪及类脂体被溶解,收缩较少,对材料无硬化作用,对染色无不良影响。
2.洗涤 倒出固定液,加入70%酒精,隔数小时后再换一次至二次,如不及时使用,可放入冰箱保存。如间隔时间较长,可在酒精中加入适量甘油,再放入冰箱中保存。
1.在85%酒精内组织可保留较久,如果当天来不及做完,可暂保存一晚,第二日再做。
2每更换一次酒精要用吸水纸把根尖吸干,免得把低浓度酒精和水分带到高浓度酒精中去,这样脱水可干净。
3组织放入二甲苯后,待组织块透明后,即可透蜡。真空抽气是为了加速组织透明,在真空情况下,二甲苯容易透入组织。如不抽气,组织在二甲苯中停留时间须在半小时以上。
