Ⅲ 发酵液中酒精含量的测定
原理
发酵醪中酒精含量的测定方法很多，如常规蒸馏法、碘量滴定法、比色法及改良康维法等，本实验采用最后一种方法。改良康维法结合了微量扩散法和比色法的优点，具有简便、快速、准确等特点，特别适合于工厂发酵液的测定要求。
本法测定时在康维皿内圈加入重铬酸钾溶液，外圈内加入发酵液。外圈边为厚壁，当涂以甘油涂料时可与皿盖密接。挥发的酒精即与重铬酸钾反应生成绿色的硫酸铬（反应方程式如下），色泽的深浅在一定范围内与酒精浓度成正比。因此通过测定醪液的OD值即可在标准曲线上查出酒精的实际浓度，即醪液中酒精的含量。
图3-2 康维皿结构示意图
仪器与材料
1、试剂：4% K2Cr2O7溶液，饱和K2CO3溶液，甘油封料。
2、其它：长滴管，1ml、2ml吸管，10ml刻度试管，康维皿，722分光光度计。
方法
1、制作标准曲线：
（1）配制4～10%（体积百分浓度）的7种浓度的酒精溶液。
（2）取8个康维皿分别在内圈中加入2ml 4% K2Cr2O7溶液。
（3）在外圈的一端加入0.4ml饱和K2CO3溶液。
（4）在外圈皿边上涂抹甘油封料，盖上皿盖使之密接。然后将皿盖推向一边，露出没有饱和K2CO3溶液的一边。
（5）在7个皿的外圈内分别加入0.2ml各浓度的酒精溶液，1个皿内加入0.2ml蒸馏水作为对照，立即盖好皿盖，轻轻转动，使酒精溶液与饱和KCO3溶液充分混合。
（6）将康维皿置于37℃恒温箱中保温至少5h。
（7）取出康维皿，打开皿盖，用长滴管吸出内圈的K2Cr2O7溶液置于10ml的刻度试管内，用蒸馏水洗涤内圈数次，洗出液一并加到试管中，直到满刻度为止。
（8）比色：用721分光光度计做560nm波长下，以对照液调“0”点，测定各酒精溶液的光密度值（OD）。
（9）绘制标准曲线：在坐标纸上，以OD值为纵坐标，酒精浓度为横坐标，绘制曲线。
2、测定发酵醪中酒精的含量。
结果
1、记录各浓度酒精溶液的OD值，填入下表，并绘制标准曲线。
2、记录发酵醪的OD值，查出酒精浓度。
