式中f为酶的稀释倍数(400),t为反应时间,以min表示。
仪器与材料
1、试剂:原碘液,标准稀碘液,比色稀碘液,标准糊精,2%可溶性淀粉溶液(现用现配),pH 6磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液。
2、其它:比色板,50ml、500ml烧杯,1ml、5ml吸管,20ml移液管,长滴管,50ml、100ml、500ml量筒,15×150mm、25×200mm试管,水浴锅。
方法
1、1%α-淀粉酶液:称取α-淀粉酶0.5g,加pH6磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液溶解后定容至50ml。在40℃水浴中恒温20min后,以4层纱布过滤,并将滤液收集在50ml小三角瓶中,稀释4倍后使用。注意:现测现配。
2、在15×150mm试管中分别加入1ml标准糊精液和3ml标准稀碘液,充分混匀后,作为比较颜色的标准管,并取3滴加入到比色板的第1穴内。
3、在比色板的每1穴内滴3滴比色稀碘液,备用。
4、在25×200mm试管中,分别加入20ml 2%可溶性淀粉液和5ml pH6磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液,混合后于60℃水浴中平衡温度10min,再加入0.5ml稀释酶液,充分混匀后即刻记时。每隔20s取出1滴酶反应液于比色板中进行显色。当反应颜色由蓝转为棕橙色,并与标准比色管颜色相同时,即为反应终点,记录此时间t。注意:测定液化时间应控制在2~3min内。
5、根据公式计算α-淀粉酶活力。
Ⅱ 玉米粉的酒精发酵
一、玉米粉的液化和糖化
玉米粉中可供发酵的物质主要是淀粉,而酿酒酵母由于缺乏相应的酶,所以不能直接利用淀粉进行酒精发酵,因此必须对原料进行预处理,通常包括蒸煮(液化)、糖化等处理。蒸煮可使淀粉糊化,并破坏细胞,形成均一的醪液,目前多数厂家开始利用α-淀粉酶的液化作用来替代蒸煮过程,这样可大大减少能源消耗。液化后的醪液能更好地接受糖化酶的作用,并转化为可发酵性糖,以便酵母进行酒精发酵。本实验要求依据前次实验测出的结果,按照α-淀粉酶反应条件的要求对玉米粉原料进行前处理。
仪器与材料
1、原料:玉米粉。
2、酶制剂:已知酶活力的α-淀粉酶制剂。
3、试剂:CaCl2,1mol/L NaOH,1mol/L HCl。
4、其它:10ml吸管,1000ml烧杯,100ml量筒,玻璃漏斗,天平,4.5~6 pH试纸,100℃温度计,玻璃棒,电炉,水浴锅。
方法
液化及糖化:将150g玉米粉置于1000ml烧杯中,先加入18000u的酶制剂(即120u/g干淀粉),接着加150ml蒸馏水调浆,然后边搅拌边加300ml 80℃以上的热水,并加入3g CaCl2,用1mol/L NaOH或HCl调pH为5.7~6.0,然后继续升温至92℃并保温30min。最后煮沸5~10min使酶灭活,降温至60℃,用1mol/L HCl调pH为4.8~5.4后,按130u/g干淀粉的酶量,将糖化酶加入到处理液中,60℃搅拌保温30min,最后定容至450ml。
二、酒精发酵
方法
1、向150ml无菌三角瓶中分装90ml糖化液,共分4瓶,其中1瓶留作对照,其余3瓶进行酒精发酵。
2、用无菌吸管向发酵瓶内接种10ml酵母种子液。
3、于28~30℃恒温箱中进行发酵。


