1. 了解从酵母中提取 RNA 的原理和方法。
2. 了解定性鉴定核酸的原理和方法。
【实验原理】
酵母含RNA 达2.67—10.0%，DNA 则少于0.03—0.516％。为此，提取RNA多以酵母为原料。 稀碱法使用稀碱（本实验用0.2% NaOH溶液）使酵母裂解，然后用酸中和, 除去蛋白质和菌体后的上清液用乙醇沉淀 RNA 。由此得到的 RNA为变性的RNA，可用作制备核苷酸的原料。
用硫酸水解 RNA 后,可生成磷酸、戊糖和碱基,各成分用以下反应加以鉴定：
（1）磷酸与钼酸铵试剂作用可生成黄色磷钼酸铵 [(NH)3PO4·12MoO3]沉淀。
（2）核糖与地衣酚试剂作用呈鲜绿色。脱氧核糖与二苯胺试剂反应生成蓝色化合物，而核糖无此反应。
（3）嘌呤碱与硝酸银反应可生成白色的嘌呤银化物沉淀。
【实验试剂和器材】
（一）试剂
酵母粉，0.2％氢氧化钠，乙酸，95％乙醇，无水乙醚，10%硫酸，浓硝酸，0.1N 硝酸银，1N 氨水。
酸化乙醇：100ml 95%乙醇，加1ml浓盐酸，pH<5.4。
钼酸铵试剂：将2g钼酸铵溶解在100ml 10% 硫酸中。
地衣酚试剂：100ml浓盐酸加入100mg三氯化铁，摇匀，贮存备用，使用前加入476 mg地衣酚。
二苯胺试剂：将4g二苯胺溶于400ml冰醋酸中，再加入11ml浓硫酸（比重1.84）。若冰醋酸不纯，试剂呈兰色或绿色，则不能使用。
（二）器材
试管，试管架，移液管，滴管，烧杯，锥形瓶，表面皿，漏斗，量筒，三用水箱,离心机，抽滤装置。
【实验方法】
（一）酵母 RNA 提取
称取4克干酵母粉，放入100毫升烧杯中，加入40毫升0.2％氢氧化钠。在沸水浴中加热30分钟，常搅拌。冷却后，3800rpm离心15分钟。取上清液，加30ml酸化乙醇，搅拌，静置5分钟。然后3000转离心15分钟。弃上清，保留沉淀，沉淀即为粗RNA。
（二）RNA 的水解
向 50ml 锥形瓶中加入 0.1-0.2 克粗酵母 RNA 和 10% H2SO4 15ml 。沸水浴 20 分钟后，3800rpm离心5分钟，取上清液进行下列实验。
（三）组分鉴定
1. 磷酸的检验
取 2ml 上清液放入 1 支试管中加入 5 滴浓 HNO3和 1ml 钼酸铵试剂后，在沸水浴中加热，观察有无黄色磷钼酸铵沉淀产生。
2. 戊糖的检验
取 2 支试管,各加入 1ml 滤液,分别加入等体积的地衣酚试剂和二苯胺试剂,在沸水浴中加热10-15 分钟。比较两支试管的颜色,并解释。
3. 嘌呤碱基的检验
取 1 支试管, 加入 1ml 0.1N AgNO3溶液, 再逐滴加入 1N 氨水至沉淀消失。然后加入 1ml 滤液, 放置片刻，观察有无白色嘌呤银化物沉淀产生（见光变为红棕色）。
【注意事项】
1. 用乙醇、乙醚清洗RNA时应用玻棒小心搅动沉淀，抽干，可得白色RNA粉末。
2. 水解组分鉴定时，应将试管清洗干净，否则会影响现象的观察。
