（4）把测定管放沸水浴中煮5分钟，取出后冷却。
（5）两管皆离心2000rpm 5分钟，把上清夜分别移入小试管中，标清管号，供层析用。
3．层析
把手洗净，操作中尽可能少用手接触滤纸，以免污染。
（1）取圆形滤纸一张（直径10cm）放洁白纸上，以圆点为中心，约1 cm为半径,用铅笔划一圆线作为基线,在线上四等份处标清四点编号作为点样原点(见图10-1)。
（2）点样：用四根毛细玻璃管分别进行点样。把丙氨酸液、谷氨酸液分别点在原点2、4处。把测定液、对照液分别点在原点1、3处。具体方法是用毛细玻璃管吸取少量液体，点到滤纸点上。注意点样点不宜过大（应在直径0.4cm以下）。如果测定液中氨基酸浓度低时，可在第一次点样点干后，再在原处同样点1~2次。
（3）层析：先在滤纸圆心处打一小孔（铅笔芯粗细），再取同样滤纸一条（约1Χ2.5cm
卷成捻如灯芯状,上端插入滤纸中心孔中。
（4）把层析溶剂（酚：水= 4：1溶液）数ml放入干燥的直径约5 cm的表面皿内。
把此皿放在直径10 cm的培养皿中。
（5）把滤纸平放在上述培养皿上，使纸芯下浸入酚液中，盖上培养皿盖（图-2）。
可见酚液沿纸芯上升到滤纸中心，渐向四周扩散。当酚液前缘到离滤纸边缘约1cm时（约30~50分钟），取出滤纸，用镊子小心取下纸芯，并用吹风机吹干滤纸。
4．显色
用喷雾器向上述滤纸均匀喷上0.5 %茚三酮溶液,用吹风机热风吹干,可见出现同心
弧状色斑,用铅笔圈下各色斑。比较各色斑的位置及颜色深浅，并按下列公式计算各色斑的Rf值，以此判定结果。
［注］
1．层析点样时手要洗净，操作中尽可能少量接触滤纸，以免污染。
2点样点不宜过大，直径小于0.4cm。
