(6)吸取培养液于灭菌离心管中,3500转/分离心10分钟,然后小心吸取上清液于另一支塞有软木塞的灭菌离心管中,加入0.2毫升氯仿(4—5滴),剧烈振荡半分钟,静止5分钟,小心把上清液用无菌吸管移入另一支灭菌试管(即λ噬菌体裂解液),供效价测定和转导用。
2.λ噬菌体的效价测定(λ噬菌体总数/毫升)
(1)前一夜挑取一环受体菌(K12gal-)接种于含有5毫升肉汤培养液的试管中,37℃培养过夜。
(2)吸取0.5毫升培养液于含有0.25毫升0.1mol/LCaCl2的4.5毫升肉汤培养液的三角瓶中,继续培养3—4小时。
(3)取已经熔化并于45℃保温的半固体琼脂试管(每管3毫升)4支,每支试管加入上述经活化后菌液0.5毫升。
(4)吸取λ噬菌体裂解液0.5毫升于含有4.5毫升肉汤培养液的试管中,依次稀释到10-6与10-7。
(5)从10-6和10-7试管中分别吸取0.5毫升于上述已加有菌的半固体试管中(每个稀释度2支),搓匀、分别倒入预先倒好并已凝固的肉汤固体培养基上,摇匀、待凝、37℃培养过夜。
(6)观察出现噬菌斑数,并估计λ噬菌体裂解液的效价(λ噬菌体数/每毫升)。
3.转导
A.点滴法:
(1)取预先倒好的EMB培养基二皿,在皿底用玻璃铅笔按下图的样子画好。
(2)取受体菌(经活化后菌液)一环,按上述图示涂二条菌带,37℃培养1.5小时。
(3)从温箱中取出培养皿,在二个圆圈和四个方格处,各滴加一环λ噬菌体裂解液(先滴加圆圈处再滴加方格处),圆圈处为λ噬菌体对照,方格处为转导试验,菌带为受体菌对照,37℃培养二天,观察结果。
B.涂布法:
(1)取预先倒好的EMB培养基四皿,其中一皿加0.1毫升λ噬菌体裂解液,用于对照;一皿加0.1毫升经活化后受体菌,也用于对照;另二皿加λ噬菌体裂解液和受体菌各0.05毫升。
(2)用3支灭菌玻璃涂棒涂布上述各组培养皿,37℃培养二天,观察结果。
C.平板注入法:
(1)将λ噬菌体裂解液用肉汤稀释为10-1、10-2、10-3、10-4,从各稀释度吸取2毫升裂解液于含有2毫升经活化后受体菌的离心管中,同时以只加λ噬菌体裂解液(2毫升10-1裂解液加2毫升肉汤培养液)和只加受体菌(2毫升经活化后受体菌加2毫升肉汤培养液)为对照。共六支灭菌离心管,37℃保温15分钟。


