四、实验说明
1.局限性转导可分为低频转导（LFT）和高频转导（HFT）。从低频转导的转导子中可分离得到用于高频转导的双重溶源化细菌，以双重溶源菌诱导制得λ噬菌体裂解液进行转导试验就称其为高频转导。
在低频转导中，用于转导的λ噬菌体大部分属正常的噬菌体（λ+），只有少数属部分缺失的转导噬菌体（λdggal+）。当大量噬菌体感染受体菌时，大部分受体菌被正常的噬菌体感染裂解死亡。尽管少部分被转导噬菌体感染，由于大量正常噬菌体的存在，往往同时也被正常噬菌体感染裂解死亡，一般认为：只有部分同时感染的细胞，首先λ+通过正常的附着位点整合到受体菌染色体上，然后，λdggal+的杂合附着位点和染色体上的杂合附着位点（由于λ+整合造成）再次整合形成不稳定杂基因子（双重溶源化细菌）整个过程见图15-2：
低频转导的转导频率较低，一般在106的感染细胞中有一个转导子出现。如改用双重溶源菌株进行诱导制备λ裂解液进行转导，情形就不同。由于λ+的存在使得λdg同时成熟，裂解液中就会出现50％正常噬菌体和50％部分缺失的λdggal+转导噬菌体，因此可以得到约50％的转导子，从而大大提高了转导频率。
2.λ溶源菌株的获得可通过较为简单的办法得到：用较高浓度的λ裂解液和用于转导的供体菌混合涂布于完全固体平板，同时做λ噬菌体和供体菌的对照。37℃培养过夜后，第二天就能看到混合涂布的平板出现单菌落，而对照涂布λ噬菌体平板无菌落、涂布供体菌平板呈现一片菌落。单菌落的出现是由于大量λ噬菌体把被感染的菌大都裂解掉，而只有少部分对λ噬菌体抗性菌落和λ溶源菌才能生长。只要区分这二种菌落，就能获得所需要的λ溶源菌株。一个简单的办法是把各个单菌落接种于一定体积的完全培养液中，37℃培养一定时间，然后离心除去上清液，用完全培养液制成菌悬液（菌液可浓一些，也可加入一定量的0.1mol/LCaCl2），各挑取一环菌液滴加于涂有菌液（对λ噬菌体敏感的指示菌）的完全固体平板上，然后以一定距离的U、V照射，37℃培养过夜，第二天观察是否有噬菌斑出现，如果噬菌斑出现，表明相应的单菌落是λ溶源菌，反之是λ噬菌体抗性菌。
同样，对低频转导的转导子进行上述的实验就能分离到高频转导的双重溶源菌，因为双重溶源的转导子经U、V照射也将会释放λ噬菌体感染敏感细菌而产生噬菌斑，相反，其它转导子经U、V照射不释放λ噬菌体不形成噬菌斑，这样我们将容易区分这种状态的转导子，而获得我们所需要的双重溶源性菌株。
五、实验步骤
1.噬菌体裂解液的制备
（1）前一夜挑取一环供体菌（K12（λ）gal+）接种于含有5毫升肉汤培养液的试管中，37℃培养过夜，然后吸取0.5毫升菌液于含有4.5毫升肉汤培养液的三角瓶中，继续培养3—4小时。
（2）将三角瓶的菌液倒入离心管，3500转/分离心10分钟。
（3）除去上清液，加4毫升磷酸缓冲液，制备菌悬液。
（4）取菌悬液3毫升于灭菌培养皿中，经U、V（15W、距离40厘米）处理，诱导10分钟。
（5）处理后加入3毫升2E肉汤培养液，37℃避光培养3－5小时。
