一、实验原理

随着分子遗传学的发展，转导已成为遗传学分析的常用方法。所谓转导就是利用噬菌体为媒介将一个细胞（供体）的遗传物质传递给另一个细胞（受体）的过程。转导可分为二类：（1）普遍性转导；（2）局限性转导（专一性转导）。本实验以局限性转导为例，用λ噬菌体专一性转导半乳糖发酵基因的现象来说明转导的基本原理，并初步掌握转导实验的基本技术。实验中所采用的供体菌株是E.coliK₁₂（λ）gal⁺。当此细菌受紫外线诱导后，原噬菌体被释放出来，其中有一定比例的噬菌体带有邻近的半乳糖发酵基因，我们称这种噬菌体为转导噬菌体（即λdggal⁺）。当转导噬菌体（λdggal⁺）感染受体菌E.coliK₁₂gal^-时，少部分（约三分之一）形成稳定的转导子，大部分（约三分之二）以杂基因子的形式形成不稳定的转导子。整个转导过程见图15-1。

1.用具：培养皿（9厘米），三角瓶（150毫升），试管（15×1.5），离心管，吸管（1毫升、5毫升、10毫升），玻璃涂棒。

2.培养基

（1）肉汤液体培养基：牛肉膏5克，蛋白胨10克，NaCl5克，蒸馏水1000毫升，pH7.0－7.2，高压灭菌15磅15分钟。

（2）加倍肉汤液体培养基（2E）：牛肉膏0.5克，蛋白胨1克，NaCl0.5克，蒸馏水50毫升，pH7.0—7.2，高压灭菌15磅15分钟。

（3）肉汤半固体培养基：肉汤液体培养基中加1％的琼脂。

（4）肉汤固体培养基：肉汤液体培养基中加2％的琼脂。

（5）半乳糖EMB培养基：伊红Y0.4克，美蓝0.06克，半乳糖10克，多胨10克，K₂HPO₄2克，琼脂20克，蒸馏水1000毫升，pH7.0—7.2，高压灭菌8磅25分钟。

（6）Vogel50×基本培养基（浓缩50倍的基本培养基）：MgSO₄·7H₂O10克，柠檬酸100克，NaNH₄HPO₄·4H₂O175克

K₂HPO₄500克，蒸馏水定容1000毫升（配好后放冰箱备用）。

（7）半乳糖基本固体培养基：Vogal50×2毫升，半乳糖2克，优质琼脂粉1.8克，蒸馏水98毫升，pH7.0，高压灭菌8磅25分钟。

（8）磷酸缓冲液：KH₂PO₄2克，K₂HPO₄7克，MgSO₄·7H₂O0.25克，蒸馏水1000毫升，高压灭菌15磅15分钟。

（9）生理盐水：NaCl8.5克，蒸馏水1000毫升，高压灭菌15磅15分钟。

（10）药品：氯仿。

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