(4)基本固体培养基:琼脂2克,基本液体培养基100毫升,pH7.0,高压灭菌8磅/英寸230分钟。
(5)无N基本液体培养基:K2HPO4O.7克(或K2HPO4·3H2O0.92克),KH2PO40.3克,柠檬酸钠·3H2O0.5克,MgSO4·7H2O0.01克,葡萄糖2克,蒸馏水100毫升,pH7.0,高压灭菌8磅/英寸230分钟。
(6)2N基本液体培养基*:K2HPO40.7克(或K2HPO4·3H2O0.92克),KH2PO40.3克,柠檬酸钠·3H2O0.5克,MgSO4·7H2O0.01克,(NH4)2SO40.2克,葡萄糖2克,蒸馏水100毫升,pH7.0,高压灭菌8磅/英寸230分钟。
(7)混合氨基酸和混合维生素及核苷酸的配制:氨基酸(包括核苷酸)分7组(I—Ⅶ),其中6组(I—VI)每组有6种氨基酸(包括核苷酸),每种氨基酸(包括核苷酸)等量研细充分混合。第7组是脯氨酸,因为这种氨基酸容易潮解,所以单独成一组。
把维生素B1、B2、B6,泛酸,对氨基苯甲酸(BAPA),烟碱酸及生物素等量研细,充分混合,配成混合维生素。
3.生理盐水:NaClO.85克,蒸馏水100毫升,高压灭菌15磅/英寸215分钟*。
四、实验说明
微生物中筛选营养缺陷型的步骤包括诱变处理、淘汰野生型、检出缺陷型、鉴定缺陷型四步。由于不同微生物和诱变剂的特性差异,所以在实际工作中,应根据具体情况而适当变动,现分别补充说明。
当选用化科诱变剂进行诱变处理时,首先应根据诱变剂的特性,确定用何种诱变剂。化学诱变剂根据它们的诱变作用可以区分为三种:1.通过掺入DNA分子而引起突变,必须通过代谢作用。属于这一类的诱变物质如碱基类似物。2.通过和DNA直接起化学反应而引起突变。多数化学诱变剂属于这一类如亚硝酸等。3.通过一对核苷酸的插入或缺失而引起突变如吖啶类物质。
化学诱变剂的剂量也以相对剂量表示。相对剂量与三个因素有关:诱变剂浓度,处理温度和处理时间。一般通过处理时间来控制剂量。处理前诱变剂和菌液分别预热,以便当二者混合后即可计算处理时间,才能精确控制剂量。处理时间应按不同的处理菌而有所区别,最适剂量应事先进行预备试验确定。
浓缩缺陷型的方法有青霉素法、菌丝过滤法,差别杀菌法、饥饿法等,这些方法适用于不同的微生物。细菌应用青霉素浓缩法,酵母菌和霉菌的缺陷型筛选可以用制霉素代替青霉素。放线菌和霉菌可用菌丝过滤法,它们的野生型孢子能在基本培养液中萌发并长成菌丝,缺陷型的孢子不能长成菌丝。所以把经诱变处理的孢子悬浮在基本培养液中振荡培养,在培养过程中过滤几次,每次培养时间不宜过长,这样才能充分浓缩。
*高渗青霉素法在2N基本培养液中加20%蔗糖和0.2%MgSO4·7H2O。


