（2）取出培养过夜的细菌，在W1177一瓶菌液中加入5毫升新鲜的完全培养液，充分摇匀，等量分成2瓶；其余3瓶菌液分别用灭菌的5毫升吸管，各吸出2.5毫升菌液，然后再各加入2.5毫升新鲜的完全培养液，充分摇匀，各菌于37℃继续培养3—5小时。
（3）自温箱取出三角烧瓶，分别倒入离心管，菌株W1177倒二支离心管，其余菌株各倒入一支离心管，离心沉淀，3，500转/分，离心10分钟。
（4）倒去上清液，打匀沉淀，加入无菌水，离心洗涤3次，再加无菌水到原体积。
2.杂交——混合培养：
（1）取12支灭菌试管，每支吸入3毫升经融化的半固体培养基，并保温在45℃（保温温度不宜高，北方气温低，可降低半固体中的琼脂量）。
（2）12支试管分成三个杂交组合，即W1177×K12pro；W1177×W1485；W1177×HfrC。每个组合各4支试管，其中2支对照，2支混合菌液。
（3）对照组试管各吸F+或Hfr供体菌菌液1毫升，其余按杂交组合各吸供体菌和受体菌菌液0.5毫升，充分混匀。
（4）将各试管中含菌的半固体倒在有Vogel培养基底层的平板上，摇匀待凝，放37℃培养，48小时后观察（图12－3）。
六、实验结果记录
