d.在每一培养皿的皿底划分四格，两格放少量组氨酸结晶粉末，另两格放少量腺嘌呤的结晶粉末。然后放到30℃温箱培养48小时。
e.观察生长情况，营养缺陷型菌株会在所需物质的周围长出来。如需要两种物质，就只能在两种物质都扩散到的地方生长。
操作步骤见图11-2。
9.实验步骤说明：
（1）步骤3—6，是为了用营养丰富的培养基培养好的新鲜细胞，并使不同接合型的细胞充分接触，形成合子，为产生孢子创造条件。
（2）步骤7中，由于酵母在产孢子培养基上不会增殖，所以要求接种足够多的细胞，使杂交形成的子囊不至于过少。
（3）步骤8（3），要从子囊中取得子囊孢子，也可用蜗牛酶充分处理子囊后，用超声波处理使子囊孢子充分分散。蜗牛酶处理温度为30°—37℃，15—30分钟。没有蜗牛酶，用石英砂振荡，也能使子囊壳破碎，散出子囊孢子。
（4）酵母菌是单细胞真菌，不形成菌丝，所以在步骤8（5）中可采用影印方法。
六、实验结果
1.影印结果：能生长用“＋”表示，不能生长用“—”表示，并计算菌落数。
2.生长谱鉴定：
3.影印与生长谱鉴定结果相比较，看结论是否一致。
4.实验结果说明：
本实验用的啤酒酵母营养缺陷型单倍体菌株，有关的ade和Hisl基因属于不同的连锁群，是两对基因的自由组合。因此在实验结果中，单倍体基因型的比例应为＋＋∶ade-∶Hisl-∶ade-Hisl-＝1∶1∶1∶1。单倍体菌株的表型比也应为1∶1∶1∶1。表型分离比直接反映了基因型的分离比。
