*吡哆醇母液：20毫克吡哆醇/100毫升水。
**泛酸母液：20毫克泛酸/100毫升。
***生物素母液：2毫克生物素/100毫升。
（6）补充培养基：
a.基本固体培养基100毫升加组氨酸3.5毫克。
b.基本固体培养基100毫升加腺嘌呤3毫克。
五、实验步骤
1.取盛有完全固体培养基斜面的试管4支。把ade-和Hisl-两菌种各接种在二支斜面上。30℃温箱中培养24小时。
2.用5毫升生理盐水洗下一支ade-斜面上的菌，再倒入另一支ade-试管中，洗下的菌最后倒入无菌离心管中。另取5毫升生理盐水洗下Hisl-二支试管斜面的菌，倒入无菌离心管中。这样制成的菌液，浓度约108/毫升。
3.两亲本菌液各吸0.5毫升，放入5毫升完全液体培养基中，30℃静止培养2小时。
4.离心（3000转/分，3分钟），30℃静止培养半小时。
5.倒去上清液，打匀管底菌块，再加入6毫升新鲜完全液体培养基，30℃培养过夜。
6.离心，倒去上清液。再加6毫升新鲜完全液体培养基，洗一次，离心，倒去上清液。
7.将离心管中的沉淀菌接种在产孢子培养基斜面上，30℃培养2—3天。在显微镜下观察杂交后形成的子囊，可见其中有4个子囊孢子。
8.测定子囊孢子的表型推断其基因型：
（l）在长有子囊的斜面上加基本培养液2毫升，用接种环将子囊刮下，倒入无菌离心管中。
（2）在55°—60℃的恒温水浴中加热15分钟，杀死酵母菌的营养体，即单倍体细胞。离心，倒去上清液，加生理盐水到原体积，形成子囊悬液。
（3）把孢子悬液倒入消毒过的盛有石英砂的三角烧瓶中，振荡5分钟，使子囊孢子散出，成为子囊孢子悬液。
（4）取打散的子囊孢子悬液0.1毫升涂布在完全培养基培养皿上，30℃培养48小时。
（5）影印培养：以上面的培养皿为原始培养皿，依次影印：a.基本培养基；b.腺嘌呤补充培养基；c.组氨酸补充培养基；d.完全培养基。30℃培养48小时。
（6）生长谱鉴定：
a.从原始培养皿上挑取各个已经初步鉴定的菌落，接种在完全培养基斜面上。同时接种在有5ml液体完全培养基的离心管中，30℃培养48小时。
b.离心（3000转/分，3分钟。），倒去上清液，打匀沉淀，然后离心洗涤三次，最后加生理盐水至原体积。
C.吸取菌液0.1毫升，移至灭过菌的空培养皿中。然后倒入融化后冷至40°—50℃的固体基本培养基，摇匀，待凝。各做1皿。
