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粗糙链孢霉的杂交实验
作者:未知 来源:生物秀 时间:2006-9-16

    7)杂交培养基:

    将玉米在水中浸软,破碎,每试管放2—3粒,加入少量琼脂(0.1克左右),再放入一小片经多次折叠的滤纸(长约3—4厘米),加上棉塞,消毒即成,不需摆斜面。

    3.药品:5%次氯酸钠(NaClO),5%石碳酸

    五、实验步骤

    1.菌种活化:为使菌种生长得更好,先要进行菌种活化。把野生型和赖氨酸缺陷型菌种从冰箱中取出,分别接在两支完全培养基试管斜面上,28℃温箱培养5天左右。培养到菌丝的上部有分生孢子产生。

    2.杂交:接种亲本菌株,可采用下述方法。

    1)同时在杂交培养基上接种两亲本菌株的分生孢子或菌丝,25℃温箱进行混合培养。注意要贴上标签,写明亲本菌株及杂交日期。在杂交后5—7天就能看到许多棕色的原子囊果出现,以后原子囊果变大变黑成子囊果,在7—14天左右,就可在显微镜下观察。

    2)在杂交培养基上接种一个亲本菌株,25℃培养5—7天后即有原子囊果出现。同时准备好另一亲本菌株的分生孢子,悬浊于无菌水中(近于白色的悬浊液),将此悬浊液加到形成原子囊果的培养物表面,使表面基本湿润即可(每支试管约加0.5毫升),继续在25℃培养。原子囊果在加进分生孢子1天后即可开始增大变黑成子囊果,7天后即成熟。

    3.显微镜观察:

    1)在长有子囊果的试管中加少量无菌水,摇动片刻,把水倒在空三角瓶中,加热煮沸,以防止分生孢子飞扬。

    2)取一载玻片,滴1—2滴5%次氯酸钠,然后用接种针挑出子囊果放在载玻片上(若附在子囊果上的分生孢子过多,可先在5%次氯酸钠中洗涤,再移到载玻片上),用另一载玻片盖上,用手指压片,将子囊果压破,置显微镜下(10×15倍)检查,即可见到30—40个子囊。观察子囊中子囊孢子的排列情况。这里用载玻片盖上压片而不用盖玻片,是因为子囊果很硬,用盖玻片压,盖玻片会破碎。也可在显微镜下用镊子把子囊果轻轻夹破,挤出子囊。如发现30—40个子囊象一串香蔗一样,可加一滴水,用解剖针把子囊拨开。此过程无需无菌操作,但要注意不能使分生孢子散出。观察过的载玻片、用过的镊子和解剖针等物都需放入5%的石碳酸中浸泡后取出洗净,以防止污染实验室。

    操作步骤见图10-5。

    4.实验步骤说明

    1)实验所用的赖氨酸缺陷型,有时接种在完全培养基上,也长不好,需要加适量赖氨酸。

    2)杂交后培养温度要控制在25℃;30℃以上即抑制原子囊果的形成。

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