五、实验说明
1、黑腹果蝇的酯酶-6（Est-6）酶带有三型，一型是仅有一条迁移率较大的酶带，这酶带在凝胶上泳动较快，称为F带，另一型仅有一条泳动较慢的带，这酶带称为S带，第三型是有两条酶带，一条F带和一条S带。实质上三种表型是由Est-6F与Est-6S一对等位基因的组合不同决定的（参见图8-1）。前二型分别是纯合体Est－6F/F和Est－6S/S，而第二型是杂合体Est-6F/S。
2.Est－6酶带在蛹期不显示，成虫刚刚羽化时也不显示，所以作电泳分析时，如为新羽化的成虫，应转入另一培养瓶中饲养二天以上，方能清晰地显示Est-6酶带。
3.本实验采用聚丙烯酰胺凝胶薄层（1mm）垂直平板电泳，具有较高的分辨率，可将带有不同电荷的酶蛋白分子分开，并且聚丙烯酰胺凝胶具分子筛的作用，也可将分子构型，大小不一的酶蛋白分子分开。由于在同一块凝胶上、同一条件作多个样品的分析，所以便于比较。
4.凡含丙烯酰胺，甲叉双丙烯酰胺的溶液均有神经性毒，慎勿沾于皮肤及粘膜上。
六、实验步骤
1.将野生型、残翅、黑檀体三个品系的果蝇分别作单对交配，即将单只处女蝇和单只雄蝇放入同一培养大指管中。放若干管。待一周后将产完卵的亲本果蝇移出。
2.对移出的亲本果蝇作Est-6的电泳分析，步骤如下（参见图8-2）：
（1）吸取a液4.9毫升、b液3.75毫升、c液3.35毫升、d液0.325毫升、e液25微升混匀，置梨形真空抽气瓶中抽气3—4分钟，加入f液0.125毫升摇匀，慢慢倒入大小为16×15×0.1cm的垂直板电泳槽的二块玻板间。玻板二边和底部预先以a液配的1％琼脂糖凝胶封住。倒入后要求一无气泡、二不渗漏。随
即以吸管铺上1-2厘米高的水层，这样凝胶聚合后，面上可呈水平。
（2）在室温下经20分钟后，凝胶与水层间出现折光不同的界面时，说明凝胶已聚合。倒去水层，用滤纸吸尽余水。该层为分离胶。
（3）吸取a液2.95毫升、g液1毫升、e液5微升、f液0.05毫升，混匀后倒入分离胶上部，然后插上样品梳。过30分钟后即聚合，该层为浓缩胶。小心抽出样品梳，这样在浓缩胶面上就留下间隔开的加样槽。用滤纸条吸净加样槽内残存的溶液。上下电泳槽分别注入电极缓冲液。
（4）凝胶聚合时间可进行样品处理。将记录好形态特征的待分析果蝇置于编好号的0.2毫升玻璃匀浆器中，加入15微升样品匀浆液，在冰浴中匀浆。匀浆完毕，置离心机中，以3500转/分离心三分钟。
（5）以微量注射器吸取上清液10微升，加入加样槽内，针头接近槽底，慢慢注入，防止扩散。
（6）在4℃冰箱内以300伏特电压开始电泳，方向从负极到正极。当溴酚蓝进入分离胶后，可将电压提至450伏特，大约2.5小时后，溴酚蓝到达底部标线处，即可结束电泳。
（7）撬开玻板，小心取下凝胶，投入染色液中，染色液以染色缓冲液30毫升，坚牢蓝RR10毫升，底物溶液1毫升组成。室温下20分钟后酯酶同工酶带已清晰显示，其中紫红色醒目的即为Est－6酶带（参见图8-1）。
（8）取出凝胶用水冲净后投入脱色固定液中漂洗过夜。脱去底色后，酶带更为清晰。可制成干片永久保存，或浸清水内，经常换水，足供一年观察。
3.选出雌蝇和雄蝇的Est－6表型均为F带或S带的纯合子的培养指管，该类培养指管出来的子代即可留作为F带纯合子或S带纯合子。
4.作不同品系间不同纯合子间的交配。正反交都可以，但母本须用处女蝇。每只指管放2—3对。
5.一周后将亲本移出。待F代出现后，移入新的培养指管中，每管放2—3对。此时雌蝇无须处女蝇。
6.一周后将F1移出，观察表型，并进行Est－6电泳分析。
