前者是葡聚糖凝胶,后者是葡聚糖凝胶和琼脂糖凝胶混合的凝胶,所以前者刚性差,不容易做高分辨率的小颗粒,而后面的可以,刚性好,不容易因为pH,盐,压力而体积有很大的变化.

140)请问上HPLC的样品盐浓度过高是否影响纯化效果？

那倒不会,但是盐浓度高和有机溶剂混合也许会产生沉淀堵柱子,所以还是要很小心,最好别有高盐

141)柱子一般寿命多久，保养好了能用四五年吗？每次上样量是否不得超过十分之一？用于装填柱子的reservoir在哪里买得到，中文名叫什么，不同规格柱子用的reservoir是否是一个规格？一般过一个柱洗脱液的流速控制在多少，大概需要洗脱液多少个柱体积，需要多长时间？

除了凝胶过滤需要严格装柱子,需要装柱器,别的柱子都不用,至于上样量也只有凝胶过滤也上样的体积有关,别的色谱都不需要遵守,一般是根据载量来上样,于体积关系不大,洗脱也看你挂东西的多少,一般3个柱床体积,多的要5个柱床体积,时间多少看你的流速和你的柱床体积.

142)凝胶过滤怎么脱盐啊,我做凝胶的时候buffer是甲酸铵，本身就是盐啊

buffer毕竟是低浓度的盐，而您过了凝胶柱后，除去了样品溶液中的大部分的盐。
 
过柱子,除盐没有什么难的,很难在这里把整个操作写一遍,甲酸胺是可挥发性的盐,你浓度不高,物质稳定的话,直接冷冻干燥,或者真空干燥都可以去掉了,没有必要过柱子,我猜测你的是多肽,过柱子也去不掉盐.

143)我提的蛋白中老是混有大量的血红蛋白，干扰实验的后续工作，非常苦恼。请问有没有那种介质可以吸附组织蛋白提取物中的血红蛋白？
144)
我们的苯基琼脂糖凝胶可以吸附血红蛋白,而且很牢固,我们以前做过,你可以用这个办法去除, 在通常不加盐的情况下就可以吸附血红蛋白。

145)DEAE－Sephadex A－50是离子交换加凝胶过滤，想请教chromatography它单纯的凝胶过滤分离范围多大？相当于Sephadex的什么型号呢？谢谢。

对这个填料不熟悉，没有用过，我觉得凝胶过滤相当于sephadex G-50，范围在1000-30000,但是它可用于纯化的蛋白分子量在30-200KD.

为什么范围和可用于纯化的分子量不一样呢？我的目的蛋白单亚基是18KD，该选哪个型号？

你是想用它做凝胶过滤还是离子交换呢，你为什么不用琼脂糖凝胶系列呢，这个填料在高盐的时候床体积变化很大，不好用。

离子交换试了四个月不行，最近一次错用成了含PO3－的缓冲液，结果还没有开始往上加NaCl梯度蛋白就下来了，后来查资料才知道PO3－会和DEAE反应，不知道是否因此使这个柱子的离子交换失效，变成单纯的凝胶过滤，所以想知道和它相当的Sephadex的型号。

那何必呢,直接用凝胶过滤好了, sephadex G-50正好适合你的蛋白。
 
146)可是产品目录上说G－50分离范围是1000－5000，适用于脱盐，我的目的蛋白是18000啊。
另外G－25有粗、中、细、超细颗粒之分，请问区别在哪里？

147)我试做过两次CNBR活化亲合配基偶联，效果不太理想；希望能得到你的指点，听你说环氧活化琼脂糖凝胶有不少优点，请给一些活化及偶联的资料吧。

你偶联的是什么配基呢，环氧活化可以选择合适的亲和手臂，例如我们常用的有3-10个碳原子的手臂，而对于一些物质的纯化，没有手臂是不行的。此外环氧活化再偶联形成的键非常稳定不容易脱落，所以我们经常用这样的办法，我已经把我们的材料发给你了，其实这样活化的方法偶联的效率也很高，它还适合带氨基，羟基，巯基等配基的偶联，应用范围很广，我觉得是不错的方法。
 
148)镍柱选择哪个厂家性价比较好呢？

国产的就很好，价格便宜，性能一点也不差于进口的，螯合好了镍离子，载量高。能少花钱的何必多花钱呢，其实所有这些厂家性能都差不多，没有太大差别。
你就选择北京卓冠科技有限公司的吧，没有必要选择进口的，你pM你的邮件地址给我。我可以把相关的材料发给你。

149)我们实验室最近纯化了一批带His tag的蛋白，大部分为包涵体形式。用8M尿素超声溶解后，用amersham的镍柱纯化，结果均不是太纯。因为我的目的是想纯化后作为抗原做ELISA检测，为了防止与血清中的抗菌抗体起反应，必需得到很纯的蛋白。所以想请教一下还可以如何优化条件或结合哪些别的纯化手段？如果几种纯化方法联用的话,怎样的顺序最合理呢？

一般通过一步亲和都可以得到不错的效果,没有必要多做几步,何况包涵体的蛋白用别的纯化方法效果未必好, 洗脱用阶段洗脱的方法,摸细致点, 相信会有好的结果的,你把你的邮件告诉我,我把我们的材料发给你参考吧.
150)我提取了一些水溶性多糖，但含大量的色素。我想用分子筛或离子交换将色素与多糖分开，不知可行吗？色素会不会粘在填料上将填料污染？
 
只能说试试,色素种类很多,多糖也是如此,我也没有做过,只能试试.

你试试MCI GEL吧，这个东西分色素非常出色。
你找这个公司要资料吧。
010-51528296
sales@herbs-extract.com

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