不会影响,但是为还是一致这样好一些.
 
131)请问chromatography ：我提纯的包涵体蛋白在经含不同浓度尿素的PBS中透析时析出来了，有什么办法可以复溶吗？我要用此蛋白去打动物。另外我的蛋白是用8M尿素裂解后用镍柱纯化的，洗涤液用的是含20ｍＭ咪唑，洗脱液用的是含250ｍＭ咪唑，但是纯化后跑SDS－PAGE发现，在洗涤液最后一管中己有我的目的蛋白，没有杂带，但在洗脱的第一管中就开始在紧邻我的目的蛋白的上方出现一条杂带，并随着我的目的蛋白洗脱浓度的降低而降低，后来我试用的增大洗涤液中咪唑浓度到40ｍＭ，结果还是一样，不知是什么原因，请问有更好的方法用镍柱纯化包涵体蛋白吗？如果我想纯化后不用透析就去打动物，有何方法呢？请多指教！谢谢！

1.如果要溶解还得用变性剂,这样变性条件下可以免疫动物,不需要除去.
2.你可以用你的抗体做WB看看是不是你的样品变成了聚合体.
3.镍柱纯化包涵体有专门的总结的帖子,你可以参考一下.
4免疫动物的问题你可以发到免疫版或者直接搜索就能找到相关的材料.

132)请问怎样在不引入其他杂质的情况下从阳离子交换层析（CM）纯化的蛋白中除掉核酸？谢谢！

加到2M硫酸铵,上苯基琼脂糖凝胶,核酸被吸附.蛋白不一定能被挂柱,阳离子柱子通常不吸附核酸的,你蛋白能被阳离子吸附,而核酸不能,这样不就可以了.所以最简单的是使核酸和你的蛋白带相反的电荷,这样用阴柱或者阳柱都可以达到你的目的.

133)我做的原核表达GST-融合蛋白，用的是Glutathione Sepharose 4B的一次性小柱子，pharmacia公司的，经过反复试验，现在已经纯化出来了，期间曾得到你的指点，再次表示感谢！
现在我要开始大量提纯蛋白了，为了节省时间，我想问一下有没有类似Glutathione Sepharose 4B的用于大量提纯蛋白的进口柱子，就是说不用自己配填料的，直接用的这种柱子？若有何处可买到？

你需要多大的柱子呢,进口的好象只有5ml的预装柱,大的要自己装填,其实自己装是一样的,没有什么差别,我发了一些材料给你了,你可以考虑用国产的.

134)我最近买了一个Amersham的中空纤维浓缩换液柱，柱子的说明书上说能承受的最大压力为15psig, 不知道psig和MPa之间怎么换算啊？15psig相当于多少MPa呢？ 多谢！！

1磅力/英寸2（psi）=6.895千帕（kPa）,所以15psi=103.425kPa=0.10MPa吧,你可以再问问他们的工程师吧,.

135) 有在柱子上切的，也有纯化后切的，切下的片段可以用原来的亲和填料去除，凝血酶也需要去除的，你可以看下面的一些材料吧：
http://www.ls.huji.ac.il/~purification/Purification_Protocols.html#Cleavage_Sites_Table_for_Fusion_Proteins
如果用凝血酶切的话，怎样去除凝血酶比较好？谢谢！

去除一般用肝素琼脂糖凝胶和苯甲脒琼脂糖凝胶.

136)我们在做多肽的纯化，都是制备用的，不知道该用哪家的填料，现在有很多厂家来推销，Vydac，Kromasil，YMC都有，不知道哪家的反相硅胶比较好呢？

大的厂家都差不多,差别不大.

137)你说阳离子柱子通常不吸附核酸的，为什么我用PH4.0上样，PH9.0洗脱，洗脱液测紫外吸收值时总在260有很高的的吸收值，难道不是核酸，那会是什么呢？
 
也许别的物 质也这样把,你可以把样品跑一下琼脂糖凝胶电泳,看看是不是就知道了.核酸酸性如果不强,你怕pH提高到5-6,这样核酸应该就挂不住,你偏酸性太多,那也许有一些会挂住,你试试吧.

138)您好chromatography ，我是新手，现在正在做牛血蛋白质的纯化，希望得到纯化的白蛋白和IgG。打算用盐析的方法先粗提白蛋白和球蛋白，然后层析分级，再超滤浓缩除盐。 现在遇到的困难是层析这部分，特向大狭您请教。
白蛋白和IgG分别应选用哪种层析方法？填料选择什么？洗脱液具体选择什么（分段洗脱）？每次上样量最大能到多（制备型）？多长时间能过完一次？柱子的寿命一般为多少？洗脱液流速控制到多少？
现在还没有做样品的电泳，所以还不知样品中杂蛋白和含量，只是在盐析中先用22%硫酸铵将纤维蛋白除去，用33%盐析出IgG样品，用50%除去拟球蛋白，用65%盐析出白蛋白样品。其中能提供以下数据①牛血清白蛋白：分子量：66210；分子形状：椭圆形；分子大小：40Å*140Å；等电点：4.7；血浆中的含量：52.0g/L。
②IgG:分子量：15300；分子形状：球状；等电点：5.8—7.3;血浆中含量：2.0g/L。
③另外，我从书上看到说：凝胶过滤在分级方法中分辨率为中等，但对脱盐效果优良；流速较低，对分级每周期约≥8小时，对脱盐仅30分钟；适用于大规模纯化的最后步骤，在纯化过程的任何阶段均可进行脱盐处理，尤其适用于两种缓冲液交替时。

白蛋白最好用蓝色琼脂糖凝胶纯化,很好用,我们都用它专门去除白蛋白,你需要我可以把材料发给你,至于IgG可以用重组蛋白A琼脂糖凝胶一步纯化,很好用,当然你也可以考虑用疏水去纯化.白蛋白也可以用镍琼脂糖凝胶柱去纯化.

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