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甲醛滴定法测定氨基酸含量
作者:未知 来源:生物秀 时间:2006-9-15
    、目的
       初步掌握甲醛滴定法测定氨基酸含量的原理和操作要点
     
    二、原理
    水溶液中的氨基酸为兼性离子,因而不能直接用碱滴定氨基酸的羧基。甲醛可与氨基酸上的—N+H3结合,形成—NH—CH2OH、—N(CH2—OH)2 等羟甲基衍生物,使N+H3上的H+游离出来,这样就可以用碱滴定N+H3放出H +,测出氨基氮,从而计算氨基酸的含量。
    若样品中只含有单一的已知氨基酸,则可由此法滴定的结果算出氨基酸的含量。若样品中含有多种氨基酸(如蛋白质水解液),测不能由此法算出氨基酸的含量。
    脯氨酸与甲醛作用后,生成的化合物不稳定,导致滴定后结果偏低;酪氨酸含酚基结构,导致滴定结果偏高。
     
    三、材料、试剂与器具
    (一)试剂
    1、0.5%酚酞酒精溶液
    称0.5g酚酞溶于100ml60%酒精中。
    2、0.05%溴麝香草酚蓝溶液
    取0.05溴麝行草酚蓝溶于100ml 20%乙醇溶液中。
    3、1%甘氨酸溶液
    取1g甘氨酸溶于100ml蒸馏水。
    4、标准0.100mol/L 氢氧化钠溶液
    5、中性甲本醛溶液
    取甲醛溶液50ml,加0.5%酚酞指示剂约3ml,滴加0.1mol/LnaOH溶液,使溶液呈微粉红色,临用前中和。
    (二)实验器具
    1、锥形瓶                      2、碱式滴定管
    1、  移液管洗耳球               4、天平
    5、容量瓶                     6、试剂瓶
    7、量筒                       8、玻棒与烧杯

    四、操作步骤 
    1、取3只100ml锥形瓶,按下表加入试剂。

    2、混匀后用标准0.100mol/L氢氧化钠溶液滴定至紫色(pH8.7~9.0)
    3、结果计算
    每毫升氨基酸溶液中含氨基氮的毫克数为

    五、注意事项
    利用甲醛滴淀法可以用来测定蛋白质的水解程度。随着蛋白质水解度的增加,滴定值也增加,当蛋白质水解完成后,滴定值不再增加。
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