一、目的 
1、学习微量凯氏定氮法的原理
2、掌握微量凯氏定氮法的操作技术，包括标准硫酸铵含量的测定，未知样品的消化、蒸馏、滴定及其含氮量的计算等。 

二、原理
凯氏定氮法常用于测定天然有机物（如蛋白质，核酸及氮基酸等）的含氮量。
天然的含氮有机物与浓硫酸共热时，其中的碳、氢二元素被氧化成二氧化碳和水，而氮则变成氨，并进一步与硫酸作用生成硫酸铵。此时程称之为“消化”。
但是，这个反应进行得比较缓慢，通常需要加入硫酸钾或硫酸钠以提高反应的沸点，并加入硫酸铜作为催化剂，以促进反应的进行。甘氨酸的消化过程可表示如下：

浓碱可使消化液中的硫酸铵分解，游离出氮，借水蒸汽将产生的氨蒸馏到一定量，一定浓度的硼酸溶液中，硼酸吸收氨后，氨与溶液中的氢离子结合，生成铵离子，使溶液中氢离子浓度降低。然后用标准无机酸滴定，直至恢复溶液中原来氢离子浓度为止，最后根据所用标准酸的当量数（相当于待测物中氨的当量数）计算出待测物中的氮量。

滴定时用甲烯蓝和甲基红混合指示剂，其指示范围为pH5.2~5.6，将NH4H2BO3的蓝色滴至原来H₃BO₃的蓝紫色即为终点。
本法适用范围0.2~1.0毫克氮。相对误差应小于2%。 
 
三、材料、试剂与器具
（一）材料
人的血清或猪的血清
（二）试剂
1、浓硫酸（化学吨）
2、30%氢氧化钠（分析纯）溶液
3、0.9%NaCl溶液
4、硫酸钾—硫酸铜混合物：硫酸钾与硫酸铜（CuSO₄、5H₂O）以3：1（W/W）的配比混合研磨成粉末。
5、2%硼酸
6、混合指示剂的配制：
方法一：取50毫升0.1%甲烯蓝无水醇溶液与200毫升0.1%甲基红无水乙醇溶液混合配成，贮于棕色瓶备用，这种指示剂酸性时为紫色，碱性时为绿色，变色范围窄且灵敏。
方法二：0.1%溴甲酚绿乙醇溶液10毫升与0.1%甲基红乙醇溶液2毫升混和即成。
本指示剂的变色范围为                     紫红色    灰色    绿色
7．0.0100M HCl
8. 硼酸一指示剂混合液：取100毫升2%硼酸溶液，滴加混合指示剂贮备液，摇匀后溶液呈现紫红色即可。（约加1毫升左右混合指示剂）
9.标准硫酸铵溶液（0.3毫克氮/毫升）

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