一.  目的
学习用浓盐法从酵母中提取RNA
掌握用等电点法沉淀RNA
观察核酸的颜色反应，了解核酸定性与定量测定的原理
熟练掌握普通离心机的使用方法
二.  原理
酵母繁殖快，生长周期短；其细胞质中的核酸大部分是RNA，而DNA很少；RNA提取液与菌体分离比较容易。因此，酵母是提取RNA的好材料。
将RNA从细胞中释放出来在工业上主要有三种方法—稀碱法、浓盐法和自溶法。本实验采用浓盐法，即利用高浓度的盐（10% NaCl）在90～100°C条件下改变了细胞膜通透性，并将核蛋白体解离成RNA和蛋白质而使RNA释放到盐溶液中。同时，90～100°C的高温可破坏磷酸单酯酶和磷酸二酯酶的活力，避免RNA的降解。注意，在30～70°C时这两种酯酶的作用活跃，提取时应避免在此温度范围内停留时间过长。由于核膜内的DNA分子量较大，穿越膜孔较困难，一般不易释放到菌体外面，所以采用离心技术，可使RNA溶液与菌体残渣以及DNA分离。
根据核酸在等电点溶解度最小的性质，将溶液在低温下调pH至2.0～2.5，RNA以白色絮状沉淀形式从盐溶液中析出。再次离心，固液分离，便可获得RNA粗产品。
最后用乙醇洗涤沉淀，溶解和去除脂溶性杂质和色素以及盐分杂质。由于RNA不溶于乙醇，所以用乙醇洗涤还可以使RNA沉淀物脱水，变得疏松，便于干燥，提高了RNA产品的纯度。

DNA和RNA的鉴别，较常用的方法是利用两类核酸中不同的戊糖各自具备的不同的颜色反应，而得以定性鉴别。其中鉴定DNA的方法称为二苯胺法，鉴定RNA的方法称为地衣酚（苔黑酚，3,5-二羟甲苯）法。具体反应式如下：


三.  实验材料及设备
1.  材料
干酵母
2.  仪器
离心机  电子天平  沸水浴  烘箱  抽滤装置  冰浴
3.  器材
普通试管：  20mL×4（干燥）
锥 形 瓶：  100mL×1
量    筒：  50mL×1
移 液 管：  1mL×2
烧    杯：  250mL×1  100mL×1  50mL×1
离 心 管：  100mL×1
温 度 计：  50℃×1
表 面 皿：  f9cm
滴    管：  2
洗 耳 球：  2
加 样 器
 pH试纸：   pH0.5～5.0
滤    纸：  f7cm
洗瓶、试管架、移液管架、试管夹、玻棒：各1

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