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3,5-二硝基水杨酸比色法测定糖的含量
作者:未知 来源:生物秀 时间:2006-9-14

    一.  目的

    了解3,5-二硝基水杨酸比色法测定糖的原理
    掌握总糖定量测定的操作方法

    二.  原理

    还原糖是指含自由醛基或酮基的单糖(如葡萄糖)和某些具有还原性的双糖(如麦芽糖)。

    它们在碱性条件下,可变成非常活泼的烯二醇。遇氧化剂时,具有还原能力,烯二醇本身则被氧化成糖酸及其他产物。


    黄色的3,5-二硝基水杨酸(DNS)试剂与还原糖在碱性条件下共热后,自身被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。在一定范围内,反应液里棕红色的深浅与还原糖的含量成正比,在波长为540nm处测定溶液的吸光度,查对标准曲线并计算,便可求得样品中还原糖的含量。
    对于非还原性的双糖(如蔗糖)以及还原性很小的多糖(如淀粉),应先用酸水解法将它们彻底水解成单糖。再借助于测定还原糖的方法,可推算出总糖的含量。由于多糖水解时,在每个单糖残基上加了一分子水,因而在计算时,须扣除加入的水量,当样品里多糖含量远大于单糖含量时,则比色测定所得总糖含量应乘以折算系数(1- = 0.9),即得比较接近实际的样品中总糖含量。
    三  实验材料及设备
    1.  材料
    面粉
    2.  仪器
    分光光度计  电子天平  沸水浴
    3.  器材
    刻度试管:  25mL×8
    容 量 瓶:  100mL×2
    锥 形 瓶:  100mL×1
    移 液 管:  1mL×2  2mL×2  10mL×2
    烧    杯:  250mL×1  50mL×1
    滴    管:  2
    洗 耳 球:  2
    滤    纸:  f11cm
    坐 标 纸
    漏斗、洗瓶、白瓷板、试管架、移液管架、试管夹、玻棒:各1

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