电泳    配制1％琼脂糖凝胶，取10ul扩增产物电泳分析PCR结果
         bf : KCl       50mmol/L 促进引物退火
Tris.HCl      10-50mmol/L PH  8.4
BSA           100ug/ml （乙酰化的BSA）对酶有保护作用
Mg离子:      1.5-2mmol/L 
1.       与d NTP 结合（PO4离子）
2.       与引物中的 EDTA结合 
3.       与模板中的 EDTA结合
4. Taq 活性需要游离的Mg离子
         购 d NTP 为25um, 需稀释10倍至2.5um
         Primers:
  Boo12  F  10D
         Boo14  R  10D
分子量  24bp * 324.5 = 7788
质量数  10D ＊ 33 ＝33ug
摩尔数  33 ／7788 ＝4.2 n mol
浓度    4.2 n mol/84ul H₂O = 50um
               取母液（50um） 1ul加水至5ul , 稀释5倍，则终浓度为10um
几种常用反应体系：
1.     在0.2ml Eppendorf 管内配制25ul反应体系   (华美PCR kit)

混匀离心 50ul 石蜡油 离心
PCR 程序     94℃  5min
94℃  1min   
60℃  1min
72℃  1min
30 cycle
72℃  5min
琼脂糖凝胶电泳分析PCR结果  配制1％琼脂糖凝胶，取10ul扩增产物电泳。

上一页  [1] [2]