(二)细胞破碎方法—化学方法
•有机溶剂处理法:利用氯仿、甲苯等脂溶性溶剂或SDS(十二烷基硫酸钠)等表面活性剂处理细胞,可将细胞膜溶解,从而使细胞破裂,此法也可以与研磨法联合使用。
•溶胀法:细胞膜为天然的半透膜,在低渗溶液和低浓度的稀盐溶液中,由于存在渗透压差,溶剂分子大量进入细胞,将细胞膜胀破释放出细胞内含物。
(三)除去RNA的方法
脱氧核糖核蛋白在浓NaCl(1-2mol/L)溶液中溶解度很大,但在0.14mol/L NaCl溶液中溶解度很低,而核糖核蛋白则溶于0.14mol/L NaCl溶液中,利用这一性质可将脱氧核糖核蛋白与绝大部分核糖核蛋白分离开来。
(四)除去蛋白质的方法
用氯仿一异成醇混合液振荡核蛋白溶液,使蛋白质变性,然后离心除去变性蛋白质,此时蛋白质凝胶停留在水相及氯仿相中间,而DNA溶于上层水相。用两倍体积95%乙醇溶液可将DNA钠盐沉淀出来。
用十二烷基硫酸钠(SDS)等去污剂使蛋白质变性,可以直接从生物材料中提取DNA。
(五)纯的DNA样品的获得
为了防止DNA酶的降解,提取时可加入适量EDTA(乙二胺四乙酸)、柠檬酸,以降低DNA酶的活性。
加入RNA酶降解剩余的RNA,获得纯的DNA。
保存:将DNA于滤纸上干燥,溶于1mlTE中低温保存。

