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动物肝脏中DNA的制备
作者:未知 来源:生物秀 时间:2006-9-12

    一、实验目的:
    学习并掌握动物组织总DNA的提取方法及其原理。

    二、实验原理:
    要获得纯的DNA样品,必须考虑以下几点:
    􀂾如何选材,如何破碎组织细胞?
    􀂾如何除去蛋白质?在真核细胞内,DNA与蛋白质结合成核蛋白的形式存在。因此,分离DNA时必须使其与蛋白质解离,并除去蛋白质。
    􀂾设法除去RNA的污染;
    􀂾防止DNA酶的降解作用;

    (一)选材
    要提取动物组织DNA,一般选择细胞膜较脆弱,容易破碎的动物脏器,如胸腺、肝脏、脾脏、胰脏、精子等。

    (二)细胞破碎方法—机械物理法:
    •研磨:将剪碎的动物组织置于研钵或匀浆器中,加入少量石英砂研磨或匀浆,破碎细胞。这种方法温和,适合实验室使用。
    •组织捣碎器:较剧烈的破碎细胞的方法,为了防止发热和升温过高,通常是转10秒—20秒,停10秒—20秒,可反复多次。
    •压榨法:在1000×105Pa—2000×105Pa 的高压下使几十毫升的细胞悬液通过一个小孔突然释放至常压,细胞将彻底破碎。温和的、彻底破碎细胞的方法,但仪器费用较高。(少量细少量细胞可用French press,大量可用Manto-gaulin
    •反复冻融法:将待破碎的细胞冷至-15℃到-20℃,然后放于室温(或40℃)迅速融化,由于细胞内形成冰粒使剩余胞液的盐浓度增高而引起细胞溶胀破碎。
    •超声波处理法:借助超声波的振动力破碎细胞壁和细胞器。使用时注意降温,防止过热。
    •冷热交替法:在90℃左右维持数分钟,立即放入冰浴中使之冷却,如此反复多次,绝大部分细胞可以被破碎。
    组织捣碎匀浆机

    超声探头

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