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单细胞凝胶电泳法检测单细胞DNA损伤
作者:陈安 来源:生物秀 时间:2006-9-12

     
     定义 TM 时将“慧星”尾部当作一个整体考虑,将头、尾部中心间距当作损伤 DNA 的平均迁移距离。事实上尾部 DNA 由不同 DNA 片段组成,不同片段迁移距离不同,即尾部 DNA 的分布并不均匀。于是, Kent 等人 [16] 提出“慧星矩”( comet moment , CM )的概念。以“慧星”头部中心点为零点,沿电泳方向将“慧星”按一定的间隔分成若干个区域( 80 个即可),分别测定每个区域的荧光强度( Di ,代表该区域 DNA 量)、该区域中心距零点的距离( Xi )、“慧星”总荧光强皮( Dt .代表总 DNA 量),则 CM 定义为∑ Di · Xi / Dt 。实验表明 [16] ,损伤因素作用剂量较大时, CM 与作用剂量间的相关性比 TM 更为密切。近年来该指标也有所应用 [7]
      与此类似,如果预先设置一定的阈值将“慧星”头尾分开,将尾部分成若干区域,以各区域面积 Si 和平均荧光强度 Di 的乘积表示该区域 DNA 的量,以头尾部总面积( Sn 、 St )与头、尾部总荧光强度( Dh 、 Di )的乘积表示头、尾部的 DNA 量, CM 就可变化为“尾部惰性”( tail interia , TI ),表示为∑ Si · Di · Xi2/ ( Sh · Dh + si · Di )( xi 为区域中心到头部中心的距离) [18] 。作者通过比较认为在描述环磷酰胺处理后人外周血淋巴细胞 DNA 损伤时,各种指标中 TI 值的灵敏度是最高的。 TI 值必须借助精密仪器和复杂的软件才可得出,日前应用很少。
    4 SCGE 的应用前景
      检测外界因素对 DNA 的损伤, SCGE 的检测结果同其它检测方法如程序外 DNA 合成( UDS )等结果相关较好 [2] ,而且 SCCE 能反映细胞群体中不同类型细胞对作用因素的不同反应,而不仅仅是群体细胞的平均效应水平,为确定遗传毒性因素的靶细胞提供了可能,也可用于肿瘤放、化疗抗性细胞的检出,为疗效评估和预后监测提供依据,同时该法方便易行,无需要求细胞处于生长状态,也无需同位素标记,其应用潜力是巨大的 [12] 。但由于其理论基础不够明确,各实验室的操作方法差异极大,包括溶解液、电泳波的配方,溶解时间、电泳参数、 DNA 结合荧光染料的选择都远远没有标准化。评价各实验室结果也没有统一的标准,因此 SCGE 有待于进一步的改进和完善。
     
    参考文献
    1 Daryl WF, et al. Mutation Res, 1995; 339:37-59
    2 Ross GM, et al. Mutation Res, 1995; 337:57-60
    3 Maria K, et al. Mutation Res, 1996; 363:89-96
    4 Singh NP, et al. Exp Cell Res, 1988; 175:184-191
    5 Hu QY, et al. Radiat Res, 1996; 146:636-645
    6 Kreja L, et al. Mutation Res, 1996; 357:63-70
    7 Ross GM, et al. Mutation Res , 1995;55:1235-1238
    8 Yu FS, et al. Mutation Res, 1997; 388:33-44
    9 Maarit HL, et al. Mutation Res, 1997; 373:31-37
    10 Tuo JS, et al.Mutation Res, 1996;368:213-219
    11 Rojas E, et al. Mutation Res, 1996; 370:115-120
    12 Olive PL. Mutation Res, 1989; 117:79-92
    13 Ostling O, et al. Biochem Biophys Res Commu, 1984; 123:291-198
    14 Poller F, et al. Int J Radiat Biol, 1996; 70:593-602
    15 Duthie SJ, et al. Mutation Res, 1997; 390:141-151
    16 Kent CRH, et al. Int J Radiat Biol, 1995; 67:655-660
    17 Olive PL, et al. Mutation Res, 1990; 122:86-94
    18 Bjorn H, et al. Mutation Res, 1995; 336:123-131

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